詳細介紹
細胞名稱 人胚胎氣管組織來源細胞;CCC-HBE-2品牌
形態(tài)特性
品牌 貼壁生長
特征特性 取材自引產(chǎn)的11周男性胚胎組織,該細胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細胞資源中心建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
傳代方法 1:
3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚胎氣管組織來源細胞;CCC-HBE-2品牌貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
CT ELISA Kit 大鼠降鈣素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ATF3/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FADD Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白 規(guī)格 0.1ml
CDT ELISA Kit 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白 96T
1-Mar 英文名稱: 膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體 0.2ml
alpha 1 Fetoprotein 英文名稱: 甲胎蛋白抗體 0.1ml
Anti-ATF3/FITC 熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA Kit 大鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-BNP/Biotin 生物素化腦鈉肽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FRG2B FRG2B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
IL-16(Human Interleukin 16) ELISA KIT 人白介素16 96T
Neurogenin 3 英文名稱: 神經(jīng)元素3抗體 0.1ml
ABP1 英文名稱: 植物生長激素ABP1抗體 1ml
Anti-BNP/Biotin 生物素化腦鈉肽抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒,英文名:SAA ELISA KiISA Kit for Human V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1大鼠表皮生長因子受體2(EGFR2)ELISA試劑盒,英文名:EGFR2 ELISA Kit大鼠Apelin蛋白(APLN)ELISA試劑盒,英文名:APLN ELISA KiISA Kit for Human Copper-transporting ATPase 1小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒,英文名:TNFsR-Ⅱ ELISA KiISA Kit for Human Advanced glycosylation end product-specific receptor小鼠細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒,英文名:Cyclin-D1 ELISA KiISA Kit for Human Vasopressin-neurophysin 2-copeptin小鼠破骨細胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒,英文名:ODF ELISA KiISA Kit for cholyglycine小鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒,英文名:Collagenase II ELISA Kit
ELISA Kit for Human Apolipoprotein L1小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒,英文名:AChRab ELISA KiISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 5小鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒,英文名:Resistin ELISA KiISA Kit for Human Cytosolic non-specific dipeptidase小鼠β-防御素1(β-BD-1)ELISA試劑盒,英文名:β-BD-1 ELISA KiISA Kit for Human Cathepsin K小鼠生長調(diào)節(jié)致基因α(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA試劑盒,英文名:GROα/CXCL1/MGSA ELISA KiISA Kit for Human Beta-defensin 129小鼠載脂蛋白A2(APOA2)ELISA試劑盒,英文名:APOA2 ELISA KiISA Kit for Human Electron transfer flavoprotein-ubiquinone oxidoreductase, mitochondrial小鼠脫氧吡啶酚(DPD)ELISA試劑盒,英文名:DPD ELISA KiISA Kit for Human Fascin-2小鼠前動力蛋白2(PK2)ELISA試劑盒,英文名:PK2 ELISA Kit
終止液 12ml 進口分裝
VIP Receptor 1 英文名稱: 血管活性腸肽受體-1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Beta-Catenin (Ser675) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
MMP-26(Matrix metalloproteinase-26) 基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
DARC 英文名稱: Duffy血型趨化因子受體抗體 0.2ml
Anti-AT2R 血管緊張素Ⅱ受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Hp-IgG(Mouse Helicobacter pylori IgG) ELISA Kit 小鼠幽門螺旋菌IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CCL9/CCL10/MIP-1 Gamma/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬細胞炎癥蛋白-1γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh EFR3A EFR3A蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
(IL-2sR)ELISA Kit 大鼠白介素2可溶性受體 96T
Munc13 英文名稱: 神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白13抗體 0.1ml
ATP6V0D2 英文名稱: ATP6V0D2蛋白抗體 0.2ml
Anti-CCL9/CCL10/MIP-1 Gamma/FITC 熒光素標(biāo)記巨噬細胞炎癥蛋白-1γ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。