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鏈球菌屬通用PCR檢測試劑盒

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更新時(shí)間:2023-10-26 14:05:18瀏覽次數(shù):279

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)
英文名稱? Streptococcus?spp.PCR 儲存條件? -20℃避光保存,避免反復(fù)凍融
分類? PCR檢測試劑盒    
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詳細(xì)介紹

使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1.
標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,54,32。
2.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3.
7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.
換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7.
用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8.
如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.
如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽性對照。

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

鏈球菌屬通用PCR檢測試劑盒

Streptococcus spp.PCR

50T

詳1.png

儲存條件:
僅用于科研14或-20樣品收集、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.
血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3.
細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20
,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

定量PCR方法:

熒光定量PCR探針法

熒光定量PCR SYBR Green染料法

快速PCR

多重 PCR

探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),這個(gè)時(shí)候,兩個(gè)平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),兩個(gè)距離較遠(yuǎn),發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,被機(jī)器收集到信號,從而檢測基因的量

染料能夠與雙鏈結(jié)合,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,染料結(jié)合到DNA上,從而發(fā)光,單個(gè)的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號,我們可以看出,染料法特異性不強(qiáng),只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。

在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,且不會影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/21/3,卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,則可將它們合并為一步,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間。這一過程也被稱為 兩步PCR法。

多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。


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PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,47000rpm離心5分鐘。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠0酸化蛋白B(P-PKB)ELISA試劑盒 ,英文名: P-PKB ELISA Kit

大鼠去甲(NA)ELISA檢測試劑盒ratNoradrenaline,NAELISAKit 96T/48T

人第10號染色體缺失并與張力蛋白同源的0酸酶(PTEN/MMAC1)免疫試劑盒 Human PTEN ELISA Kit

Ratneuophilelastase,NEELISAKit大鼠中性粒細(xì)胞彈性(NE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

ELISA分析20樣本

MousereceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISA試劑盒小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
PAP ELISA Kit
大鼠前列腺酸性0酸酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

單抗 單抗Multi-class antibodies規(guī)格:

Rhesus antibody Rh FRK/PTK5 胃腸道相關(guān)酪抗體(蛋白酪5) 規(guī)格 0.2ml

AcSDKP(Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro) ELISA Kit 小鼠N-乙?;?span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸 96T

Neurocan 英文名稱: 神經(jīng)粘蛋白抗體 0.1ml

AFAP1L2 英文名稱: AFAP1L2抗體 0.2ml

單抗 單抗Multi-class antibodies規(guī)格:
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Rhesus antibody Rh PAR4 活化受體4抗體 規(guī)格 0.1ml

LAMP3 Kit Human CD208 / DC-LAMP / LAMP3 ELISA配對抗體 ELISA

TBRG1 英文名稱: 轉(zhuǎn)化生長因子β調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.2ml

CDK1 英文名稱: 周期素依賴性1抗體 0.1ml

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