詳細(xì)介紹
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
產(chǎn)品名稱 | 人GAPDH基因染料法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Fluorescent quantitative PCR kit for human GAPDH Gene |
貨號 | YSP96341 |
?自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
產(chǎn)品僅用于科研引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
紅色熒光細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B)細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
考馬斯亮藍(lán)細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
XTT比色法細(xì)胞繁殖測定試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
CCK-1(水溶性四氮唑-1 )比色法細(xì)胞繁殖測定試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
CCK-8(水溶性四氮唑-8) 比色法細(xì)胞繁殖測定試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
酚藏花紅(PHENOSAFRANINE)植物細(xì)胞繁殖測定試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
二乙酸熒光素(Fluorescein diacetate)植物細(xì)胞繁殖測定試劑盒125mL×4外觀包裝:紅色液體
25公斤/塑料桶可拆
伊文思藍(lán)(EVANS BLUE)植物細(xì)胞繁殖測定試劑盒125mL×4外觀包裝:淡黃液體
25公斤/塑料桶可拆
蟲卵細(xì)胞活力和死亡熒光定量檢測試劑盒125mL×4外觀包裝:褐色粉狀
25KG/塑料桶可拆
蟲卵細(xì)胞活力和死亡體外裂卵(in vitro excystation)定量檢測試劑盒125mL×4外觀包裝:棕黃粉狀
25KG/紙板桶可拆
蟲卵細(xì)胞活力和死亡細(xì)胞流式定量檢測試劑盒125mL×4外觀包裝:棕黃粉狀
25KG/紙板桶可拆
染色體核型吉姆莎染色分析試劑盒125mL×4外觀包裝:棕色粉狀
25KG/紙板桶可拆
聚乙二醇細(xì)胞融合試劑盒125mL×4外觀包裝:棕色粉狀
25KG/紙板桶可拆
電擊法細(xì)胞融合試劑盒125mL×4外觀包裝:棕黃粉狀
25KG/紙板桶可拆
甲基纖維素細(xì)胞克隆試劑盒125mL×4外觀包裝:棕色粉狀
25KG/紙板桶可拆
人GAPDH基因染料法熒光定量PCR試劑盒芳香烴受體抗體 英文縮寫:ACCN5
吸引素抗體 英文縮寫:ACCSL
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體 英文縮寫:ACD
蛋白激酶B2 英文縮寫:ACE
血管生成素2抗體 英文縮寫:ACE( ACE, testis-specific isoform precursor)
芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體 英文縮寫:ACE2
腺苷A2A受體抗體 英文縮寫:ACE2(Angiotensin converting enzyme 2)
蛋白激酶A錨定蛋白95抗體 英文縮寫:ACEI
頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體 英文縮寫:ACEI (Angiotensin I Converting Enzyme Inhibitor )
去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 英文縮寫:Acetoacetyl-CoA synthetase