詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB119 PCR試劑盒 |
英文名稱 | Ghb119 PCR kit for transgenic cotton |
貨號 | YSP96819 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
水通道蛋白12B(AQP12B) 規(guī)格:100mg 英文:NR-2
水通道蛋白7(AQP7) 規(guī)格:100mg 英文:OFQ/N
水通道蛋白8(AQP8) 規(guī)格:1g 英文:Lebtospira
牛血清白蛋白(BSA) 規(guī)格:0.2g 英文:Leptospira
牛痘相關(guān)激酶1(VRK1) 規(guī)格:0.2g/支 英文:LepIgG
牛磺酸轉(zhuǎn)運蛋白(TAUT) 規(guī)格:3g 英文:TR
毛狀樣蛋白1(COTL1) 規(guī)格:1ml 英文:Testoterone
毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變因子(ATM) 規(guī)格:100mg 英文:T
毛透明蛋白(TCHH) 規(guī)格:50mg 英文:HVA
反三碘甲狀腺原氨酸(rT3) 規(guī)格:20mg 英文:MHB
反式高爾基體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)蛋白2(TGOLN2) 規(guī)格:20mg 英文:hCG
反胰島素樣生長因子2(IGF2AS) 規(guī)格:100mg 英文:HMG-17
反胰島素樣生長因子2(IGF2AS) 規(guī)格:1g 英文:HMGB-1
反胰島素樣生長因子2(IGF2AS) 規(guī)格:50mg 英文:HMGB1
分層蛋白(SFN) 規(guī)格:20mg 英文:u-T3
Eupalitin阿扎哌隆 分子式:C10H6ClNO2 純度:99.0%
Luteolin 5-methyl ether鹽酸阿扎司瓊 分子式:C7H5ClN2S 純度:99.0%
Kaempferol 3-O-sophoroside氮卓斯汀堿 分子式:C14H15N3 純度:99.0%
Violanone桿菌肽鋅 分子式:C11H8O3 純度:99.0%
Luteolin 5,3'-dimethyl ether鹽酸貝那普利/苯那普利 分子式:C12H10O4 純度:95.0%
Kaempferol 3-O-sophoroside-7-O-glucoside鹽酸貝那普利/苯那普利(標準品) 分子式:C19H24O3 純度:99.0%
(2S)-Pinocembrin 7-O-[2''-O-(5'''-O-trans-cinnamoyl)-β-D-apiofuranosyl]-β-D-glucoside苯扎貝特 分子式:C6H12N2O 純度:98.0%
Cryptomerin B苯扎貝特(標準品) 分子式:C14H15NO 純度:98.0%
Kayaflavone布南色林 分子式:C6H8O3 純度:98.0%
轉(zhuǎn)基因品系棉花GHB119 PCR試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體GPR37樣蛋白1抗體 英文縮寫:Fumarate hydratase
G蛋白偶聯(lián)受體GPR105蛋白抗體 英文縮寫:FUNDC1
G蛋白偶聯(lián)受體GPR12蛋白抗體 英文縮寫:Furin
G蛋白偶聯(lián)受體GPR110蛋白抗體 英文縮寫:FUS
G蛋白偶聯(lián)受體GPR125蛋白抗體 英文縮寫:FUSIP1
G蛋白偶聯(lián)受體RTA蛋白抗體 英文縮寫:FUT1
G蛋白偶聯(lián)受體GPR155蛋白抗體 英文縮寫:FUT11
G蛋白偶聯(lián)受體GPR30蛋白抗體 英文縮寫:FUT2
G蛋白偶聯(lián)受體GPR86蛋白抗體 英文縮寫:FUT3/CD174
G蛋白偶聯(lián)受體HM74蛋白抗體 英文縮寫:Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。