詳細(xì)介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米DBT418 PCR試劑盒 |
英文名稱 | Dbt418 PCR kit for transgenic maize |
貨號(hào) | YSP96889 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
Cripto1(NT) 畸胎瘤衍生長因子(N端) 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml 6Chloroimidazo[1,2b]pyridazine
CCDC85B 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白85B 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Adenine phosphate
PTOV1 前列腺腫瘤高表達(dá)蛋白1 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Hypoxanthine
Cripto1 畸胎瘤衍生長因子(C端) 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Guanine
Cripto 1 monoclonal (CT) 畸胎瘤衍生長因子單克隆(C端) 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Guanine
Cripto 1 monoclonal 畸胎瘤衍生長因子單克隆 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Watersoluble tetrazoliuM 8;GLT008
CSFV Polyprotein 豬瘟病毒 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml GLT005
SMN1 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml GLT004
Interleukin 36β英文簡稱IL36β7號(hào)染色體開放閱讀框72 檢測范圍:2110nmol/L320pg/ml
MSA3IgG antibody英文簡稱MSA3IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白42 檢測范圍:2111nmol/L200ng/mL
Gli英文簡稱Gli卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白43 檢測范圍:2112nmol/L2000pg/mL
Epidermal growth factor Like Domain Protein, Multiple 7英文簡稱EGFL7卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白46 檢測范圍:2113nmol/L30μg/ml
amyloid beta英文簡稱Aβ卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白63 檢測范圍:2114nmol/L480ng/mL
Voltagedependent calcium channel subunit alpha2 delta1英文簡稱CACNA2D1卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54 檢測范圍:2115nmol/L20ng/mL
Parathyroid Hormone Receptor 1英文簡稱PTHR1卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白61 檢測范圍:2116nmol/L20ng/mL
papillomavirus 16 L2 protein英文簡稱HPV16 L2 protein卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8 檢測范圍:2117nmol/L
Interferon γ antibody英文簡稱IFNγAb細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CABLES1 檢測范圍:2118nmol/L80ng/mL
Ceramide Kinase英文簡稱CERK細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白3 檢測范圍:2119nmol/L80ng/mL
hexosaminidase英文簡稱Hex細(xì)胞分裂周期2樣蛋白激酶5 檢測范圍:2120nmol/L24ng/mL
Coenzyme A英文簡稱CoA神經(jīng)酰激酶CERK 檢測范圍:2121nmol/L100U/L
Cluster of Differentiation 39英文簡稱CD39細(xì)胞分裂周期樣激酶2 檢測范圍:2122nmol/L200ng/mL
S100 Calcium Binding Protein B英文簡稱S100β細(xì)胞分裂周期樣激酶3 檢測范圍:2123nmol/L8ng/mL
phosphorylated TAR DNA binding protein 43英文簡稱pTDP43維甲調(diào)節(jié)核基質(zhì)相關(guān)蛋白 檢測范圍:2124nmol/L20ng/mL
轉(zhuǎn)基因品系玉米DBT418 PCR試劑盒高爾基體自身蛋白GM130抗體 英文縮寫:GPR21
糖代謝相關(guān)蛋白1抗體 英文縮寫:GPR22
G蛋白偶聯(lián)受體64抗體 英文縮寫:GPR24
γ氨基丁酸受體相關(guān)蛋白樣1抗體 英文縮寫:GPR25
法尼基二磷酸合酶1抗體 英文縮寫:GPR26
鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白1抗體 英文縮寫:GPR27
膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAPδ抗體 英文縮寫:GPR3
β半乳糖苷酶抗體 英文縮寫:GPR30
巨軸索神經(jīng)病蛋白GAN抗體 英文縮寫:GPR30
G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體 英文縮寫:GPR30(G Protein Coupled Receptor 30)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。