詳細介紹
產(chǎn)品僅用于科研注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因品系玉米MON863 PCR試劑盒 |
英文名稱 | PCR kit for transgenic maize MON863 |
貨號 | YSP96883 |
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
產(chǎn)品僅用于科研不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
肝細胞核因子6β(HNF6β)(學發(fā)光免疫分析法)Rosin純度:97%
肝細胞生長因子(HGF)(學發(fā)光免疫分析法)Formononetin純度:≥98%
肝細胞生長因子(HGF)(學發(fā)光免疫分析法)Fomononetin7Oglucoside/ononin純度:95%
肝細胞生長因子(HGF)(學發(fā)光免疫分析法)(−)Gallocatechin純度:97%
肝細胞生長因子(HGF)(學發(fā)光免疫分析法)GCG純度:≥98%
肝細胞生長因子(HGF)(學發(fā)光免疫分析法)Pseudoginsenoside F11純度:≥98%
肝細胞生長因子(HGF)(學發(fā)光免疫分析法)GUANOSINE純度:≥95%
FGFR3/CD333 成纖維細胞生長因子受體3 * 0.1ml Specnuezhenide
FGFR4/CD334 成纖維細胞生長因子受體4 * 0.1ml Gastrodin
PBOV1 前列腺癌和癌高表達蛋白 * 0.2ml Gastrodin
FGFR5/FGFRL1 成纖維細胞生長因子受體5 * 0.1ml Stevioside
FGFR1OP/FOP 成纖維細胞生長因子受體1原癌基因伴侶蛋白 * 0.2ml Tubeimoside I
FGF23 成纖維細胞生長因子23 * 0.2ml Pseudolaric Acid B
FGL2 凝血酶原酶(纖維介素) * 0.2ml Alantolactone
RAD54B DNA修復和重組蛋白RAD54B * 0.2ml Ecdysterone
轉(zhuǎn)基因品系玉米MON863 PCR試劑盒葡萄糖合成酶2抗體 英文縮寫:GPM6B
谷草轉(zhuǎn)氨酶2抗體 英文縮寫:GPNMB
葡萄糖-6磷酸脫氫酶抗體 英文縮寫:GPR 151
葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白5抗體 英文縮寫:GPR1
葡萄糖合成酶1抗體 英文縮寫:GPR1
G蛋白修補結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 英文縮寫:GPR10
甘油激酶3抗體 英文縮寫:GPR10
高爾基體磷蛋白3樣蛋白抗體 英文縮寫:GPR100
磷酸化谷氨酸受體1抗體 英文縮寫:GPR101
G蛋白修補結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 英文縮寫:GPR101
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。