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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱(chēng) | Recombinant Phosphoinositide Kinase, FYVE Fin | 物種 | Mus musculus (Mouse，小鼠) |
| 來(lái)源 | 原核表達(dá) | 應(yīng)用 | Cell culture; Activity Assa |
詳細(xì)介紹
樣品要求：
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說(shuō)明。
2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明任何特殊情況。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！
產(chǎn)品名稱(chēng)：含FYVE指磷酸肌醇激酶(PIKFYVE)重組蛋白
英文名稱(chēng)：Recombinant Phosphoinositide Kinase, FYVE Finger Containing (PIKFYVE)
PIP5K3; CFD; PIP5K; PIKfyve; p235; Phosphatidylinositol-3-Phosphate/Phosphatidylinositol 5-Kinase,Type III; 1-phosphatidylinositol 3-phosphate 5-kinase
酶與激酶
物種：Mus musculus (Mouse，小鼠) 來(lái)源：原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定) 亞細(xì)胞定位：：n/a 預(yù)測(cè)分子量：32.0kDa 實(shí)際分子量：-(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)) 片段與標(biāo)簽：Thr1680~Glu1931 (Accession # Q9Z1T6) with 緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） 性狀：凍干粉 純度：> 95% 等電點(diǎn)：- 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
相關(guān)產(chǎn)品：
蛋白激酶D1(PKD1)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來(lái)源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2(ECE2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來(lái)源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
棕櫚酰蛋白硫酯酶1(PPT1)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來(lái)源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過(guò)程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶(hù)在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。
(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過(guò)濾后的無(wú)菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來(lái)保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類(lèi)固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類(lèi),多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。
操作步驟：
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL～1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
阿馬帕里病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Amapari virus(AMAV)RTPCR
艾美耳球蟲(chóng)屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Eimeria spp.PCR
奧爾帕瓦約病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Allpaahuayo virus(ALLV)RTPCR
巴貝斯屬蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Babesia spp.PCR
大鼠無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3A(W3A)ELISA試劑盒 ，英文名： W3A ELISA Kit
Mouse eosinophil chemotactic factor (ECF) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒
Mouseplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISAKit 小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHSPgp96(HumanHeatShockProteinglycoprotein96)ELISAKit人熱休克蛋白糖蛋白96規(guī)格：48T/96T
細(xì)胞MUSK活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitIL鼠白介素10規(guī)格：48T/96T
含FYVE指磷酸肌醇激酶(PIKFYVE)重組蛋白加州立克次體PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Ajellomyces capsulate PCR
莢膜組織胞漿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Histoplasma capsulatumPCR
莢膜組織胞漿菌馬皮疽變種PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Histoplasma capsulatum var. farciminosumPCR
甲型流感病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱(chēng); Influenza Virus ARTPCR
蛋白表達(dá)及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
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