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γ-分泌激活蛋白(gSAP)重組蛋白

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更新時間:2023-03-30 15:04:08瀏覽次數(shù):330

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 說明書
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 科研
英文名稱 Recombinant Gamma-Secretase Activating Protei 物種 Homo sapiens (Human,人)
來源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
γ-分泌激活蛋白(gSAP)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品:硫氧還蛋白還原酶1(TXNRD1)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 谷氨氨肽酶(ENPEP)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 腺苷酸環(huán)化酶1(ADCY1)重組蛋白 物種; Mus musculus (Mouse,

詳細(xì)介紹

標(biāo)簽選擇:

親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHOHEK293

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試,條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAEWB

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

僅供科研實驗產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

物種

性狀

來源

γ-分泌激活蛋白(gSAP)重組蛋白

Homo sapiens (Human,人)

凍干粉

原核表達(dá)

英文名稱:Recombinant Gamma-Secretase Activating Protein (gSAP)

PION; Pigeon Homolog

酶與激酶

物種:Homo sapiens (Human,人)

來源:原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位::高爾基體

預(yù)測分子量:31.1kDa

實際分子量:32kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽:Asp616~Leu854 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.

性狀:凍干粉

純度:> 97%

等電點:7.9

應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

相關(guān)產(chǎn)品:

蘋果酸脫氫酶1(MDH1)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

甘露糖磷酸異構(gòu)酶(MPI)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

TANK結(jié)合激酶1(TBK1)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

1.png

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測

  誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng),按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

操作步驟 :

根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

解沒食子酸鏈球菌PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Streptococcus gallolyticusPCR

錦鯉皰疹病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Koi Herpesvirus(KHV)PCR

巨細(xì)胞病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Cytomegalovirus(CMV)PCR

卡氏枝孢霉PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Cladosporium carrioniiPCR

大鼠羧肽酶A1(CPA1)ELISA試劑盒 ,英文名: CPA1 ELISA Kit

Mouse glycogen syhase kinase (GSK) ELISA Kit 小鼠糖原合成酶(GSK)ELISA試劑盒

ratadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit 大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHK(HumanHexokinase)ELISAKit人己糖規(guī)格:48T/96T

細(xì)胞PRK2活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

ELISAKit6-keto-PGF1a大鼠6同前列腺素F1a規(guī)格:48T/96T

γ-分泌激活蛋白(gSAP)重組蛋白萊氏無膽甾原體PCR檢測試劑盒 英文名稱; Acholeplasma laidlawii PCR

藍(lán)舌病病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Bluetongue Virus(BTV)RTPCR

藍(lán)舌病病毒型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Bluetongue Virus(BTV)8RTPCR

藍(lán)氏賈第鞭毛蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Giardia lambliaPCR

注意事項:  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作


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