磷脂酰肌醇-4-激酶α(PI4Ka)重組蛋白的相關產(chǎn)品：泛素樣修飾激活酶2(UBA2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 磷酸甘油酸變位酶2(PGAM2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉 核糖核酸酶T2(RNASET2)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，

僅供科研實驗產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Phosphatidylinositol-4-Kinase Catalytic Alpha (PI4Ka)

PIK4CA; PI4K-ALPHA; pi4K230

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：細胞膜, 細胞質(zhì)

預測分子量：64.1kDa

實際分子量：64kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Met1~Trp300 with N-terminal His and GST Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點：9.3

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

標簽選擇：

親和標簽：蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類：一類是短肽類標簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟：

a.      選擇表達載體和宿主細胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達小試，條件優(yōu)化

f.       表達分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟：

a.      選擇表達載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達菌株

e.      蛋白表達小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達蛋白的分析、純化、檢測

　　誘導表達成功后，表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當，按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

注意事項：  

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

相關產(chǎn)品：

血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)重組蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

肌球蛋白輕鏈激酶2(MYLK2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

AMP激活蛋白激酶γ3(PRKAg3)重組蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?；靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品： 切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

同豬皰疹病毒Ⅰ型奧葉茲基氏病病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Aujeszky's Disease Virus(ADV，Ⅰ)PCR

桃拉綜合癥病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Taura Syndrome Virus(TSV)PCR

四角瑞氏絳蟲PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Raillietina tetragonaPCR

疏PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Borrelia afzelii PCR

WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4) 一種新的絲/家族成員的基因WNK4(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Cdc6 細胞分裂周期蛋白6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh OPGL/RANKL/ODF 骨保護蛋白配體抗體(破骨細胞分化因子) 規(guī)格 0.1ml

CA8 Kit Mouse 小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 ELISA配對抗體 ELISA

TMEM161A 英文名稱： 跨膜蛋白161A抗體 0.2ml

Chloramphenicol 英文名稱： 氯單克隆抗體 0.2ml

Anti-Cdc6 細胞分裂周期蛋白6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

磷脂酰肌醇-4-激酶α(PI4Ka)重組蛋白變形桿菌屬通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Proteus spp.PCR

表皮葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus epidermidisPCR

丙型肝炎病毒型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Hepatitis C Virus(HCV)1RTPCR

病毒性神經(jīng)壞死病病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Viral Nervous Necrosis Virus(VNNV)RTPCR