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核糖核酸外切酶1(ERI1)重組蛋白

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更新時(shí)間:2023-03-31 14:45:01瀏覽次數(shù):337

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 詳見說明書
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 科研
英文名稱 Recombinant Exoribonuclease 1 (ERI1) 物種 Mus musculus (Mouse,小鼠)
來源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
核糖核酸外切酶1(ERI1)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品:磷酸肌醇-3-激酶2β肽(PIK3C2b)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 5'-核苷酸酶Ⅱ(NT5C2)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅲβ(TOP3b)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Hum

詳細(xì)介紹

相關(guān)產(chǎn)品:

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僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

物種

性狀

來源

核糖核酸外切酶1(ERI1)重組蛋白

Mus musculus (Mouse,小鼠)

凍干粉

原核表達(dá)

英文名稱:Recombinant Exoribonuclease 1 (ERI1)

THEX1; 3'HEXO; 3'-5' exonuclease ERI1; Histone mRNA 3'-end-specific exoribonuclease; Enhanced RNAi Three Prime mRNA Exonuclease Homolog 1

酶與激酶

物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)

來源:原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位::n/a

預(yù)測(cè)分子量:43.2kDa

實(shí)際分子量:-(差異分析請(qǐng)參閱說明書)

片段與標(biāo)簽:Met1~Lys345 with

緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% TrehaloseProclin300.

性狀:凍干粉

純度:> 95%

等電點(diǎn):-

應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

1.png

標(biāo)簽選擇:

親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHOHEK293

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試,條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAEWB

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測(cè)和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGEWB鑒定

GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

  誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。

操作步驟 :

根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

大鼠白血病病毒PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Rat Leukemia Virus(RaLV)RTPCR

大腸彎曲桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Campylobacter coliPCR

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CTBP2 英文名稱: C末端結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml

Anti-Emp1 表皮膜蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

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異尖線蟲屬PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Anisakis spp.PCR

陰溝腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Enterobacter cloacaePCR

嬰兒利什曼蟲PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Leishmania infantumPCR

注意事項(xiàng):  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。

2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,操作時(shí)請(qǐng)小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作


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