溶血磷脂酶Ⅱ(LYPLA2)重組蛋白的相關(guān)產(chǎn)品：尿苷單磷酸合成酶(UMPS)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 Janus激酶2(JAK2)活性蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉 N-肉豆蔻?；D(zhuǎn)移酶2(NMT2)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源；

僅供科研實驗產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Lysophospholipase II (LYPLA2)

APT-2; LPL-II; Acyl-protein thioesterase 2

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：細(xì)胞質(zhì), 細(xì)胞外基質(zhì)

預(yù)測分子量：24.5kDa

實際分子量：24kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Met1~Thr196 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點：6.4

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

注意事項：  

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

相關(guān)產(chǎn)品：

組蛋白脫乙?；?span>1(HDAC1)活性蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

氨基己糖苷酶Aα(HEXa)活性蛋白 物種； Mus musculus (Mouse，小鼠) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

核糖核酸酶P(RNASEP)活性蛋白 物種； Rattus norvegicus (Rat，大鼠) 來源； 原核表達(dá) 性狀：凍干粉

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?；靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品： 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

安氏網(wǎng)尾線蟲PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Dictyocaulus arnfieldiPCR

埃立克體屬通用PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Ehrlichiae spp.PCR

阿留申病病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Aleutian Disease Virus(ADV)PCR

羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒 規(guī)格 50T 英文; Rous′ Sarcoma Virus(RSV)RTPCR

TNF- Beta 小鼠壞死因子-βMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-ET-1 內(nèi)皮素-1單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MS4A3/CD20L CD20樣蛋白抗體(造血干細(xì)胞4跨膜蛋白3) 規(guī)格 0.2ml

ATA(Human anti-trophoblast antibody,ATA ) ELISA Kit 人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞抗體 96T

Sorbitol Dehydrogenase 英文名稱： 脫氫酶抗體 0.1ml

PVRL1 英文名稱： 脊髓灰質(zhì)炎受體相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml

Anti-ET-1 內(nèi)皮素-1單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

溶血磷脂酶Ⅱ(LYPLA2)重組蛋白阿菲波菌屬通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Afipia spp.PCR

阿馬帕里病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Amapari virus(AMAV)RTPCR

埃希氏菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Escherichia spp.PCR

安氏網(wǎng)尾線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Dictyocaulus arnfieldiPCR