化工儀器網
產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 詳見說明書 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 化工 | 主要用途 | 科研 |
| 英文名稱 | Recombinant Carboxypeptidase A5 (CPA5) | 物種 | Homo sapiens (Human，人) |
| 來源 | 原核表達 | 應用 | Cell culture; Activity Assa |
詳細介紹
蛋白表達及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
產品名稱：羧肽酶A5(CPA5)重組蛋白
英文名稱：Recombinant Carboxypeptidase A5 (CPA5)
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來源：原核表達 宿主E.coli 內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位：：分泌 預測分子量：- 實際分子量：-(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽：N-terminal His Tag 緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） 性狀：凍干粉 純度：> 97% 等電點：- 應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg |
相關產品：
氨基乙二酸半醛合酶(AASS)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉
造血細胞激酶(HCK)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉
肌醇六磷酸激酶1(IHPK1)重組蛋白 物種； Homo sapiens (Human，人) 來源； 原核表達 性狀：凍干粉
樣品要求：
1、待標記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標記物結合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明。
2、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結構式。
5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應用中經常遇到的問題。
(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質不僅要轉錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內含子,對翻譯后的蛋白質進行加工,這樣表達的蛋白質具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質二級結構改變以及凍干過程中蛋白質的伸展和聚集,也是一種普遍應用的凍干保護劑和填充劑。
操作步驟：
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。
4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細胞數量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL～1 mL |
5×106個 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融
公司產品僅供科研使用，不得用于臨床！
枝孢霉通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Cladosporium spp.PCR 50T
豬腸病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Porcine Enterovirus(PEV)RTPCR 50T
豬輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Porcine rotavirus RTPCR 50T
豬圓環(huán)病毒通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Porcine Circovirus(PCV)PCR 50T
SMN1(survival of motor neuron 1) 運動神經元生存蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-BLNK B淋巴細胞連接蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh PGBD1/Cerebral protein 4 腦蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
Dysferlin 濃縮液 0.1ml 進口分裝
TWEAK 英文名稱： 壞死因子配體超家族成員12抗體 0.1ml
CK10 英文名稱： 細胞角蛋白10抗體 0.1ml
Anti-BLNK B淋巴細胞連接蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
羧肽酶A5(CPA5)重組蛋白阿古尼嗜血桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Haemophilus agniPCR
阿尼昂尼昂病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; O'nyongnyong Virus(ONNV)RTPCR
艾美耳球蟲屬通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Eimeria spp.PCR
鵪鶉奇異線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Cyrnea coliniPCR
化工儀器網