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多巴色素異構(gòu)酶(DCT)重組蛋白

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更新時(shí)間:2023-04-03 10:22:41瀏覽次數(shù):239

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 詳見說明書
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 科研
英文名稱 Recombinant Dopachrome Tautomerase (DCT) 物種 Homo sapiens (Human,人)
來源 原核表達(dá) 應(yīng)用 Cell culture; Activity Assa
多巴色素異構(gòu)酶(DCT)重組蛋白公司正在銷售的產(chǎn)品:蛋白激酶Bα(PKBa)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 膽綠素還原酶A(BLVRA)重組蛋白 物種; Homo sapiens (Human,人) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 核糖核酸酶A3(RNASE3)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來

詳細(xì)介紹

公司產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床!

產(chǎn)品名稱:多巴色素異構(gòu)酶(DCT)重組蛋白

 英文名稱:Recombinant Dopachrome Tautomerase (DCT)

TYRP2; TRP-2; DT; Dopachrome Delta-Isomerase; Tyrosine-Related Protein 2; L-dopachrome Delta-isomerase

酶與激酶 腫瘤免疫 激素代謝

物種:Homo   sapiens (Human,人)

來源:原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位::細(xì)胞膜

預(yù)測分子量:30.8kDa

實(shí)際分子量:31kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽:Val28~Gly263   with N-terminal His Tag

緩沖液成份:100mM   NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% TrehaloseProclin300

性狀:凍干粉

純度:>   90%

等電點(diǎn):8.5

應(yīng)用:Positive   Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg   5mg

 

樣品要求:

1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,如有特殊成分,請?zhí)崆皹?biāo)注說明。

2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg,最好是干粉,如果是液體,濃度應(yīng)大于1mg/ml

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息;小分子多肽需提供氨基酸序列;小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
相關(guān)產(chǎn)品:

髓過氧化物酶(MPO)卵白蛋白偶聯(lián)物 物種; Bos taurus; Bovine (Cattle,牛) 來源; 蛋白偶聯(lián) 性狀:凍干粉 羧肽酶N2(CPN2)重組蛋白 物種; Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉 核糖核酸外切酶1(ERI1)重組蛋白 物種; Mus musculus (Mouse,小鼠) 來源; 原核表達(dá) 性狀:凍干粉

蛋白表達(dá)及純化:

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清)。

3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,-80條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲(chǔ)存過程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。

放線菌屬通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Actinomyces spp.PCR 50T

肺炎克雷伯菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Klebsiella pnenmoniaePCR 50T

奮森疏PCR檢測試劑盒 英文名稱; Borrelia vincentiPCR 50T

蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Aethina tumidaPCR 50T

phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008) 0酸化蛋白酪JAK-2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

Anti-AE3/SLC4A3 陰離子交換蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Caveolin-2(Tyr19) 0酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體 規(guī)格 0.1ml

DAB染色試劑盒-每套3支試劑 200/20ml 黃色,用于IHCWB

VAPA 英文名稱: 囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)蛋白A抗體 0.2ml

DNA Polymerase Kappa/POLK 英文名稱: DNA聚合酶κ/DNA pol κ抗體 0.2ml

Anti-AE3/SLC4A3 陰離子交換蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

多巴色素異構(gòu)酶(DCT)重組蛋白血紅鏈球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Streptococcus sanguinis PCR

雪腐鐮刀菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Fusarium nivalePCR

旋毛蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Trichinella spp.PCR

旋毛蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Trichinella spiralisPCR

操作步驟:

實(shí)體組織蛋白的提取

1. 在每1mL Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2  100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.51 mL Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作;

3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4離心5 min;

4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);

5. 分裝保存于-70,避免反復(fù)凍融。

培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;

2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;

3. 在每 1mL Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:

細(xì)胞數(shù)量

Lysis Buffer加入量

107個(gè)

0.5 mL1 mL

5×106個(gè)

0.2 mL0.5 mL

5.置于4搖床平臺(tái)上,溫和振蕩15 min;

6 14,000rpm,4離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);

7. 分裝保存于-70,避免反復(fù)凍融

 


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