詳細(xì)介紹
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
產(chǎn)品僅用于科研儲存條件:
14℃或-20℃
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因構(gòu)建35S啟動子-Cry3A基因PCR試劑盒 |
英文名稱 | Construction of 35S promoter cry3A gene PCR kit |
貨號 | YSP97001 |
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
反應(yīng)五要素:
產(chǎn)品僅用于科研參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATG隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
ICOS Others Human 人 ICOS / AILIM / CD278 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
長尾綠猴腎細(xì)胞;4647
IL21 Others Rat 大鼠 IL21 / Ierleukin 21 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
獼猴皮膚細(xì)胞;MMS7 人淋巴胚胎性癌細(xì)胞,Cates-1B細(xì)胞 MDA-MB-453(癌細(xì)胞)
黑人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞;RAJI
小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CCL11/Eotaxin 1 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格: 0.2ml
CCL12/MCP5 單核細(xì)胞趨化蛋白5標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格: 0.2ml
CCL13/MCP-4 單核細(xì)胞趨化蛋白4標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格: 0.2ml
CCL14/HCC-1 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白14標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格: 0.2ml
CCL15/MIP5 巨噬細(xì)胞炎性蛋白15規(guī)格: 0.2ml
鹽酸己定(標(biāo)準(zhǔn)品) 規(guī)格:AR,分析純 1H-Benzotriazole
鹽酸嗪(標(biāo)準(zhǔn)品) 規(guī)格:>99%,BR Betahistine Dihydrochloride
鹽酸嗪 規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Betahistine Dihydrochloride
鹽酸那林(標(biāo)準(zhǔn)品) 規(guī)格:>98%,BR Betahistine Dimesilate
鹽酸洛哌(標(biāo)準(zhǔn)品) 規(guī)格:BR,來源豬胰臟 INSULIN
鹽酸洛哌 規(guī)格:AR,>99% Bismuth oxide
鹽酸洛美沙星(標(biāo)準(zhǔn)品) 規(guī)格:進(jìn)口原裝,98% 2-Chloro-1,3-propanediol
鹽酸洛美沙星 規(guī)格:>99% Bisoprolol fumarate
鹽酸洛美利嗪 規(guī)格:純度>99% Bromhexine HCl
鹽酸洛貝林 規(guī)格:>95%,USP Bupivacaine HCl
轉(zhuǎn)基因構(gòu)建35S啟動子-Cry3A基因PCR試劑盒整合素α5抗體Integrin α5 英文縮寫:Inhibin beta A peptide
整合素β1/Integrin β1抗體 英文縮寫:Inhibin beta B
整合素αVβ3抗體 英文縮寫:Inhibin beta B
胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體 英文縮寫:Inhibin Beta C
甲型流感病毒血凝素抗體 英文縮寫:iNOS
甲型流感病毒血凝素抗體 英文縮寫:iNOS
整合素αVβ5抗體 英文縮寫:Inosine triphosphate pyrophosphatase
干擾素調(diào)節(jié)因子1抗體 英文縮寫:INPP5F
白介素6 英文縮寫:INPPL1
γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16抗體 英文縮寫:INSC