標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類:一類是短肽類標(biāo)簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 性狀 | 來源 |
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性蛋白 | Homo sapiens (Human,人) | 凍干粉 | 原核表達(dá) |
英文名稱:Active Angiotensin I Converting Enzyme 2 (ACE2)
ACEH; ACEII; ACE-II; Peptidyl-Dipeptidase A; ACE-related carboxypeptidase; Angiotensin-converting enzyme homolog; Metalloprotease MPROT15
酶與激酶 代謝通路 內(nèi)分泌學(xué) 心腦血管 神經(jīng)科學(xué) 肝膽病學(xué)
物種:Homo sapiens (Human,人)
緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點(diǎn):7.2
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點(diǎn):7.2
應(yīng)用:Cell culture; Activity Assays.
規(guī)格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
相關(guān)產(chǎn)品:
ATM(ataxia telangiectasia mutated 0.5mgATM(ataxia telangiectasia mutated) 毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗原
APP Protein Human 重組人 Beta-amyloid 40 / Beta-APP40 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
TNFRSF1B重組小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
CD40 Protein Rat 重組大鼠 CD40 / TNFRSF
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測應(yīng)該順當(dāng),按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫?span>PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1、樣品前處理:
a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
葡萄孢菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Botrytis cinerea PCR 50T
普羅威登斯菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Providencia spp.PCR 50T
氣管比翼線蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Syngamus tracheaPCR 50T
槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Dicrocoelium dentriticumPCR 50T
MIP-1 Alpha 人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1αMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Calretinin 鈣結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Nm23-H2 抑制基因抗體 規(guī)格 0.1ml
Human immunosuppressive acidic protein,IAP ELISA Kit 人免疫抑制酸性蛋白 96T
Tetraspan 5 英文名稱: 四分子交聯(lián)體5抗體 0.1ml
CSGALNACT1 英文名稱: 軟骨素β1/β-1,4-GalNAc-T抗體 0.2ml
Anti-Calretinin 鈣結(jié)合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性蛋白肺炎克雷伯菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Klebsiella pnenmoniaePCR
肺炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; MetaRTPCR
肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Pneumocystis spp.PCR
肥胖帶絳蟲PCR檢測試劑盒 英文名稱; Taenia saginataPCR
注意事項(xiàng):
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。
2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時(shí),有時(shí)需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對人體有害,操作時(shí)請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作