詳細(xì)介紹
豬血管生成素1(ANG-1)Elisa試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
【適用儀器】
半自動的酶標(biāo)儀,如Thermo MK3,或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。
2、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
豬血管生成素1(ANG-1)Elisa試劑盒操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫(平衡1小時),標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
5、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
8、如此重復(fù)4次(共洗板5次)。若使用自動洗板機(jī),請按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL,在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
【檢驗結(jié)果的解釋】
檢測完成后,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo),對應(yīng)的吸光度(OD值)作為橫坐標(biāo),利用計算機(jī)軟件,采用四參數(shù)Logistic曲線擬合(4-pl),創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數(shù),才是樣品的zui終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用,過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值,請將樣本適當(dāng)稀釋后,再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果,檢測前,請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果,與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無破損漏氣。
2、劑量反應(yīng)曲線線性
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.9900。
3、精密度
批內(nèi)精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進(jìn)行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
zui低檢出劑量小于1.0mIU/L。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品,進(jìn)行五次回收率評估,回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組豬胰島素(INS),與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
7、穩(wěn)定性
客戶須知:
1、液體類標(biāo)本(細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等)。
2、樣本保存:請盡早檢測,2-8℃保存一天;需更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集樣本,請將樣本及時分裝標(biāo)號后,置-20℃或-70℃保存;
3、請?zhí)崆案嬖V我們:您樣本的種屬、樣本數(shù)量、待測指標(biāo)及其他特殊要求。
購買豬血管生成素1(ANG-1)Elisa試劑盒承諾:
1.有質(zhì)量問題免費(fèi)包換,合同上注明了的.(質(zhì)量問題包括運(yùn)輸不當(dāng),客戶在使用過程中測不出結(jié)果,等等!)
2.全程技術(shù)指導(dǎo)。(包括售前的標(biāo)本收集,使用過程中不明白的地方,實驗結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析,有任何疑問,我們技術(shù)都會即時給你去電)
3.提供免費(fèi)代測的服務(wù)。(你只需把標(biāo)本寄過來,我們?yōu)槟愎?jié)省時間,幫你出結(jié)果,原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù)均可提供,一般時間是5天左右)
4.客戶有任何問題,我們都是在一個工作日之內(nèi)給出解決方案。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠為客戶服務(wù)。
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。
2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后,按照建議的條件保存,校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,有效期為14天,其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
豬血管生成素1(ANG-1)Elisa試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:
線粒體呼吸鏈復(fù)合物 Ⅱ 活性測試盒
(琥珀酸-輔酶Q還原酶) 20管/10樣 盒 生化法
線粒體呼吸鏈復(fù)合物 Ⅲ 活性測試盒
(輔酶Q-細(xì)胞色素C還原酶) 20管/10樣 盒 生化法
線粒體呼吸鏈復(fù)合物 Ⅳ 活性測試盒
(正鐵細(xì)胞色素C-氧化還原酶) 20管/10樣 盒 生化法
線粒體呼吸鏈復(fù)合物 Ⅴ 活性測試盒
(F0F1-ATP酶/ATP合成酶測試盒) 20管/10樣 盒 生化法
細(xì)胞色素C氧化酶活性測試盒 20T 盒 生化法
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)測試盒 100管/48樣 盒 微量定磷法
20管 盒 速率法
ATP含量測試盒 100管/48樣 盒 比色法
ATP含量測試盒 200T 盒 化學(xué)發(fā)光法
硝酸還原酶(NR)測試盒 50管/24樣 盒 可見光比色法
100管/48樣 盒 可見光比色法
蔗糖合成酶(SS)測試盒 50管/24樣 盒 紫外比色法
100管/48樣 盒 紫外比色法
蔗糖磷酸合成酶(SPS)測試盒 50管/24樣 盒 紫外比色法
100管/48樣 盒 紫外比色法
蔗糖測試盒 50管/48樣 盒 紫外比色法
50管/48樣 盒 國標(biāo)法
植物提取液 100ml 瓶 /
內(nèi)源性一氧化碳(CO)測試盒(測全血) 50T/48樣 盒 比色法
內(nèi)源性一氧化碳(CO)測試盒(測組織) 50T/48樣 盒 比色法
內(nèi)源性一氧化碳(CO)測試盒(測血清 / 血漿) 100T/50樣 盒 比色法
高鐵血紅蛋白(MetHb)測試盒 50T/48樣 盒 比色法
100T/96樣 盒 比色法
總羰基含量測試盒(測體外液體樣本) 50T/48樣 盒 紫外比色法
谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)(GRAC)測試盒 100T/48樣 盒 比色法
乙酰膽堿(ACH)含量測試盒(測組織) 48T 盒 微板法
乙酰膽堿(ACH)含量測試盒(測血清) 48T 盒 微板法
乙酰膽堿(ACH)含量測試盒(測培養(yǎng)液) 48T 盒 微板法
脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量測試盒 20T 盒 比色法
50T 盒 比色法
100T 盒 比色法
脯氨酸(Pro)含量測試盒 50T/48樣 盒 比色法