血液線粒體和核DNA雙提試劑盒是在本公司血液 DNAout 產(chǎn)品基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從新鮮或冷凍的哺乳動物抗凝全血中同時提取細(xì)胞核 DNA 和線粒體 DNA 的試劑。

血液線粒體和核DNA雙提試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 一份樣品可以同時得到細(xì)胞核 DNA 和線粒體 DNA，節(jié)約寶貴的實驗材料。
2. DNA 產(chǎn)率高。細(xì)胞核 DNA 產(chǎn)率一般為 30-50 ug/mL 新鮮血液，線粒體 DNA
產(chǎn)率約為 1 ug/mL 新鮮血液。陳舊血液 DNA 產(chǎn)率差別較大。
3. DNA 純凈，OD260/OD280 在 1.8-2.0 之間，可直接用于 PCR、酶切、雜交等
實驗。
4. 適用于哺乳動物血液，不適用于其他動物血液。
5. 所用試劑安全無毒，健康環(huán)保。
規(guī)格及成分 成 份 編 號
25 次大盒包裝
（120810-25）
紅細(xì)胞裂解液 D 型 250 mL
溶液 A 120810A 25 mL
溶液 B 120810B 2 mL
溶液 C 120810C 5 mL
DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL
使用手冊 120810sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存, 保存期限一年。
自備試劑 無水乙醇，75%乙醇。
使用方法 一：白細(xì)胞核和線粒體的分離
1. 將 3 mL 用 EDTA 抗凝管收集的新鮮血液轉(zhuǎn)移到一個干凈的 15 mL 塑料離心管
中。注意：zui使用新鮮血液。對于陳舊血液，由于凍凝過程中冰晶已經(jīng)對細(xì)胞
核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以 DNA 得率會大大減少，具體減少多少根據(jù)凍凝時
間長短不同而不同。
2. 向血液中加入等體積（3 mL）的 D 型紅細(xì)胞裂解液；輕柔顛倒數(shù)次混勻，室溫
靜置 10 分鐘以裂解紅細(xì)胞和白細(xì)胞的細(xì)胞膜，直至溶液變成清澈的紅色。注意：
D 型紅細(xì)胞裂解液一旦打開后，非常容易污染細(xì)菌，未用完的部分zui-20℃保存，
下次使用前，要溶解后充分搖勻。
3. 室溫下 1000 g 離心 10 分鐘沉淀白細(xì)胞核。
4. 轉(zhuǎn)移上清（含線粒體）到新的 15 mL 塑料離心管中，注意不要觸及白細(xì)胞核沉淀。
5. 在白細(xì)胞核沉淀中加入 3 mL D 型紅細(xì)胞裂解液。輕柔顛倒數(shù)次混勻后，室溫下
1000 g 離心 10 分鐘以沉淀白細(xì)胞核。
6. 轉(zhuǎn)移上清（含線粒體）到第 4 步所得的、已經(jīng)含有上清的 15 mL 塑料離心管中。
將白細(xì)胞核沉淀放置冰上，和即將準(zhǔn)備好的線粒體一起用于 DNA 提取，也可以放
置在-20℃待用。
7. 將匯集的含線粒體的上清于 4℃下 15,000g 離心 30 分鐘。
8. 小心移棄上清，小心將線粒體沉淀重懸在 1 mL D 型紅細(xì)胞裂解液中，然后轉(zhuǎn)移
到 1.5 mL 塑料離心管中，15000 g 離心 5 分鐘，移棄上清得到線粒體沉淀。
9. 用 1 mL D 型紅細(xì)胞裂解液洗滌線粒體 2 次（每次先重懸線粒體，再 15000 g
離心 5 分鐘得沉淀）。
10.所得線粒體可以直接用于 DNA 提取，也可放置在-20℃待用。
二：DNA 的提?。ㄏ旅娌襟E為白細(xì)胞核 DNA 提取和線粒體 DNA 提取通用）
11.在白細(xì)胞沉淀或線粒體沉淀中加入 0.5 mL 溶液 A，用移液槍吹打數(shù)次混勻后再
加入 75 uL 溶液 B，混勻后于 55℃溫育 10 分鐘。注意：溶液將成渾濁狀。
12.再加入 0.2 mL 溶液 C 充分顛倒混勻。
13.在 4℃下 13000g 離心 20 分鐘后，將上清（含 DNA）轉(zhuǎn)入一新的 1.5 mL 塑料
離心管中。
14.加入兩倍體積的自備無水乙醇充分震蕩混勻后，室溫 13000 g 離心 5 分鐘，去盡
上清。
15.加入 1 mL 75%乙醇，充分混勻后室溫 13000g 離心 5 分鐘，去盡上清。
16.重復(fù)上步一次。
17.短暫離心，去盡殘留溶液（此步十分重要，不要省略）。
18.短暫晾干半分鐘，加入適量 DNA 洗脫液 2.0 溶解 DNA（對細(xì)胞核 DNA，可加入
500 uL DNA 洗脫液 2.0，對線粒體 DNA，可加入 50 uL DNA 洗脫液 2.0）。
19.65℃保溫 15 分鐘以便*溶解 DNA 沉淀。溶解后的 DNA 可以立即用于后續(xù)的
OD 檢測、酶切、PCR 或其他實驗，也可以放置在-20℃長期保存。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 血液 DNAout（Cat#：3671-50）