詳細(xì)介紹
乙酰膽堿酯酶染色液(亞鐵氰化銅法)試劑盒膽堿酯酶(cholinesterase,ChE)屬于特異性酯酶,可分為兩大類。一
類是乙酰膽堿酯酶(Acetyl cholinesterase,AChE)又稱為真性膽堿酯酶,
能水解乙酰膽堿,起到生理的調(diào)節(jié)作用;另一類為膽堿酯酶,又稱假性膽堿酯
酶(Pseudo cholinesterase,PsChE),能水解膽堿的酯而不能水解乙酰膽
堿酯。AChE 主要存在于神經(jīng)元的胞質(zhì)內(nèi)、神經(jīng)與肌肉接頭處即所謂運(yùn)動終板
處;PsChE 主要存在于血漿、胰腺、唾液腺內(nèi)。
乙酰膽堿酯酶染色液(亞鐵氰化銅法)試劑盒的染色原理是乙酰膽堿酯酶水解碘化乙酰硫代膽堿,釋放乙酸和硫
代膽堿。硫代膽堿中的硫氫基(-SH)把鐵化鉀還原為亞鐵化鉀,后者與銅離子
結(jié)合形成不溶性的紅棕色至深棕色的亞鐵氰化銅沉淀在酶活性部位而顯示出
來。
特點(diǎn)如下:
1. 操作簡單、酯酶的擴(kuò)散較少。
2. 可用于觀察中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)纖維等疾病情況下的改變。
3. 有機(jī)農(nóng)藥中毒時可使該酶受到抑制,酶的活性下降而呈陰性反應(yīng)。
規(guī)格及成分 成份 編號 2x50 mL 紙盒包裝
成分 A1 160681A1 25 mg
溶液 A2 160681A2 5 mL
溶液 A3 160681A3 35 mL
溶液 A4 160681A4 5 mL
溶液 A5 160681A5 5 mL
溶液 A6 160681A6 1 mL
溶液 B 160681B 50 mL
溶液 C 160681C 1 mL
使用手冊 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,4℃避光保存(其中溶液 A2 需常溫保存,溶液 A6 需-20℃避光保
存),有效期半年。
自備試劑 10%甲醛鈣固定液(CAT#:131276)(可從天恩澤另購)
使用方法 1. 冰凍切片,厚 6 μm,不固定或置于遇冷的 10%甲醛鈣固定液中固定 10
分鐘。
2. 蒸餾水洗 3 次,每次 1 分鐘。
3. 配制溶液 A 混合液:臨用前,取 A2 加入 A1 中,使后者*溶解,得到
A12混合液。取適量的溶液 A12混合液、溶液 A3、A4、A5、A6,按 1:
7:1:1:0.2 比例充分混勻,即可得到溶液 A 混合液,6 小時內(nèi)使用。
注:如果想顯示 AChE 和 ChE,即無需區(qū)分 AChE 和 ChE,無需加入
溶液 A6。
4. 切片加入到預(yù)溫的配制好的溶液 A 混合液中,37℃避光孵育 1~3 小時(一
般不超過 6 小時),至切片呈淡棕色時取出。
5. 蒸餾水沖洗,鏡下觀察如活性部位仍較淡,可于蒸餾水洗后再進(jìn)行孵育,
至反應(yīng)合適為止。
6. 流水沖洗 5 分鐘。
7. 滴加溶液 B 淺染細(xì)胞核 3~5 分鐘。
8. 流水沖洗 10 分鐘。
9. 常規(guī)脫蠟透明,中性樹膠封固。
10. 染色結(jié)果:AChE 酶活性部位為紅棕至深棕色,細(xì)胞核為藍(lán)色。
陰性對照(可選步驟)
取配置好的溶液 A 混合液,按溶液 A 混合液:溶液 C=50:1 比例充分混
勻得到溶液 AC 混合液。取相同切片加入溶液 AC 混合液中,其余操作同上,
染色結(jié)果呈陰性反應(yīng)。
注意事項(xiàng) 1. 本染色液適用于冰凍切片,同時應(yīng)減少切片在室溫暴露的時間。
2. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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