該產(chǎn)品可用于細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法或流式細(xì)胞術(shù)。Hypoxyprobe?-1 RED ATTO 594試劑盒在福爾馬林固定、石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供強有力的免疫染色，并且背景非常低。

規(guī)格

a. Hypoxyprobe?-1 RED ATTO 594試劑盒含有100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（噻米嗪鹽酸鹽）。通常在動物實驗中使用的劑量為60 mg/kg體重。

b. 每個試劑盒（100 mg和200 mg）含有一瓶，或者每個1000 mg試劑盒含有兩瓶，瓶中包含200微升稀釋后的RED ATTO 594染料結(jié)合的IgG1大鼠單克隆抗噻米嗪抗體（克隆號11.23.22.R）。每瓶含有200微升0.50 mg/ml的RED ATTO 594染料-MAb1溶液，溶液中含有1% BSA和0.09%疊D化鈉。RED ATTO 594染料-MAb1的最佳稀釋度由研究者自行確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋比例在大鼠腫瘤組織中能產(chǎn)生強的免疫熒光染色。RED ATTO 594染料-MAb1專門設(shè)計用于免疫熒光，能夠在熒光顯微鏡下觀察，亦可用于流式細(xì)胞術(shù)和西方印跡應(yīng)用。通常，在免疫熒光中的抗體稀釋度低于免疫過氧化物酶檢測系統(tǒng)中使用的稀釋度。

不包括的內(nèi)容

未提供用于免疫組化分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

作為Hypoxyprobe在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦Hypoxyprobe熱銷產(chǎn)品【缺氧探針】ATTO 594。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

缺氧探針?-1 RED ATTO 594試劑盒組件詳細(xì)描述：

缺氧探針?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱為鹽酸匹莫醇（pimonidazole hydrochloride），分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）；在324納米波長下具有紫外線吸收（在0.9%生理鹽水中的消光系數(shù)為7020）。其游離堿性形式匹莫醇的分子量為254.3，pKa為8.7，辛醇-水分配系數(shù)為8.5。有關(guān)缺氧探針?-1的作用機制、固體缺氧探針?-1在室溫下避光儲存已達(dá)兩年，并在0.9%生理鹽水（100克/升）中于4°C儲存了4.5年而沒有發(fā)現(xiàn)降解（通過紫外光和高效液相色譜分析）。匹莫醇在缺氧細(xì)胞中被還原活化，并與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的巰基（硫氫基）形成穩(wěn)定的加合物。RED ATTO 594染料-MAb1與這些加合物結(jié)合，從而實現(xiàn)其通過免疫化學(xué)方法的檢測。

RED ATTO 594染料-MAb1是一種與染料結(jié)合的鼠IgG1單克隆抗體（單克隆克隆4.3.11.3），其濃度為0.5毫克/毫升，溶解在含1% BSA和0.09%疊D化鈉作為穩(wěn)定劑的PBS中。感興趣的組織可以通過免疫組化技術(shù)在冷凍固定切片或福爾馬林固定石蠟包埋切片上進(jìn)行研究，或通過組織解離后的流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。注意：RED ATTO 594染料-MAb1與匹莫醇的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在免疫組化過程中，組織處理會洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫組化檢測缺氧主要依賴于缺氧組織中匹莫醇的蛋白質(zhì)加合物。

存儲

a. 在黑暗中室溫保存Hypoxyprobe?-1固體（也可在2-8°C的黑暗中保存）。

b. 在黑暗中將RED ATTO 594染料-MAb存放在2-8°C的溫度下。請勿冷凍。

檢測說明：

正常或腫瘤組織缺氧的研究開始于靜脈輸注、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe?-1（哌莫地喹鹽酸鹽）溶液，劑量為60 mg/kg體重。對于一只25克的老鼠，這相當(dāng)于1.5 mg/只。雖然在小鼠中使用高達(dá)400 mg/kg的劑量未觀察到明顯的毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg的劑量能以低成本提供良好的免疫染色效果。

Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可以使用非常小的體積來給藥。注射或攝入后，Hypoxyprobe?-1會分布到所有組織，包括大腦，但只有在氧氣濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中，它才會與含硫蛋白質(zhì)形成加合物——相當(dāng)于37°C時的部分壓力pO2 = 10 mm Hg。除了腫瘤外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中也存在pO2 = 10 mm Hg或更低的細(xì)胞，這些正常組織會結(jié)合Hypoxyprobe?-1。Hypoxyprobe?-1在小鼠中的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下，老鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。

在Hypoxyprobe?-1給藥后15到90分鐘內(nèi)，可以收集感興趣的老鼠組織。在收集時，組織中的Hypoxyprobe?-1會在組織缺氧時結(jié)合，但與組織在15到90分鐘實驗中接觸的Hypoxyprobe?-1量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1非常少，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1而造成的非特異性結(jié)合是不可檢測的。

除了動物研究外，Hypoxyprobe?試劑盒還可以用于細(xì)胞培養(yǎng)。通常，細(xì)胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1存在下，缺氧培養(yǎng)1到2小時。細(xì)胞通過細(xì)胞離心法收集，固定后用RED ATTO 594 MAb-1進(jìn)行免疫染色。

建議的免疫染色方案：

使用FITC標(biāo)記的抗哌莫地喹大鼠單克隆抗體，對福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片中的哌莫地喹加合物進(jìn)行免疫染色。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標(biāo)志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細(xì)胞因子，所有產(chǎn)品皆基于Pimonidazole核心結(jié)構(gòu)來開發(fā)。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標(biāo)記物，廣泛用在狗、大小鼠。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標(biāo)記不同（可應(yīng)用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），WB或流式細(xì)胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

缺氧探針ATTO 594缺氧探針ATTO 594