血紅蛋白檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于檢測(cè)大鼠血清和血漿樣本中血紅蛋白的定量測(cè)定。

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血紅蛋白(大鼠)ELISA, 96孔檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）的原理在圖1中表示。在這種測(cè)定中，樣品中存在的血紅蛋白與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗血紅蛋白抗體反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗HM抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的HM形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB），測(cè)定結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中HM的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中HM濃度的量度。測(cè)試樣品中HM的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

試劑準(zhǔn)備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

? 稀釋液濃縮液

提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1:5。

? 洗滌液濃縮液

提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1:20。濃縮液在儲(chǔ)存溫度較低時(shí)可能會(huì)形成晶體。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

? 酶-抗體結(jié)合物

通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條中添加10微升酶-抗體結(jié)合物到990微升1倍稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋，并避光保存。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

? 預(yù)涂覆ELISA微孔板

按提供狀態(tài)使用。打開(kāi)箔袋，從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

? 大鼠HM校準(zhǔn)液

根據(jù)批次特定的分析證書進(jìn)行準(zhǔn)備。

未提供的所需材料

? 精密移液器（2微升至100微升），用于制備和分發(fā)稀釋液

? 試管

? 噴霧瓶或微孔板洗滌器/抽吸器

? 蒸餾水或去離子水

? 微孔板讀取器

? 用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

? 計(jì)時(shí)器

? 樣本收集用的離心機(jī)

? 用于血漿樣本收集的抗凝劑

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。

如果血液樣本出現(xiàn)凝固、嚴(yán)重溶血、脂血，或樣本完整性受到質(zhì)疑，應(yīng)做記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣本收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。尚未評(píng)估樣本穩(wěn)定性。

? 血清樣本 - 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。血凝塊形成后通過(guò)離心分離血清。取出血清并立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

? 血漿樣本 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

? 已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣本稀釋

測(cè)定要求在測(cè)試前對(duì)每個(gè)測(cè)試樣本進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，所有樣本都應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。推薦的稀釋只是建議。稀釋應(yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度，使稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋。

? 血清和血漿樣本 - 推薦的起始稀釋為1:10,000。要準(zhǔn)備1:10,000的樣本稀釋，將5微升的樣本轉(zhuǎn)移到495微升的1倍稀釋液中。這給出1:100的稀釋。接下來(lái)，將5微升的1:100稀釋樣本加入到495微升的1倍稀釋液中。這產(chǎn)生1:10,000的樣本稀釋。在每個(gè)階段c底混合。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

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