AMA-M2-G是一種使用天然線粒體M2的固相酶免疫測(cè)定法用于定量和定性檢測(cè)人血清中M2抗體的抗原。該檢測(cè)是診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）的工具。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品 抗M2（IgG）ELISA。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

抗M2（IgG）ELISA檢測(cè)原理：

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）是一種影響小和中等大小膽管的慢性炎癥性疾病，血清學(xué)特征是循環(huán)中的M2自身抗體的存在?？筂2自身抗體屬于抗線粒體抗體（AMA）組。M2亞型的AMA異質(zhì)性反應(yīng)特異性是針對(duì)α-酮酸脫氫酶復(fù)合體的三個(gè)相關(guān)蛋白，該復(fù)合體位于內(nèi)線粒體膜上。主要識(shí)別的表位位于丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC）的E2亞基和蛋白X上。此外，AMA-M2-G自身抗體還識(shí)別同一復(fù)合體的(E1α和E1β)亞基以及多個(gè)其他多酶復(fù)合體的E2亞基，如2-氧戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC）和支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC）。

確定AMA-M2-G是診斷PBC的有力工具。

試劑盒組成：

需要重新配制的：

5倍樣本緩沖液1瓶，20毫升 - 5倍濃縮（白色瓶蓋：黃色溶液）

成分：Tris, NaCl, 牛血清白蛋白（BSA）, 疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

50倍洗滌緩沖液1瓶，20毫升 - 50倍濃縮（白色瓶蓋：綠色溶液）

成分：Tris, NaCl, 吐溫20, 疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

即用型：

陰性對(duì)照1瓶，1.5毫升（綠色瓶蓋：無(wú)色溶液）

成分：人血清（稀釋），疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

陽(yáng)性對(duì)照1瓶，1.5毫升（紅色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋），疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

截止校準(zhǔn)液1瓶，1.5毫升（藍(lán)色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋），疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

校準(zhǔn)液6瓶，每瓶1.5毫升，濃度分別為0, 3, 10, 30, 100, 300 U/ml

（顏色隨濃度增加而加深：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋），疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

結(jié)合物1瓶，15毫升IgG（藍(lán)色瓶蓋：藍(lán)色溶液）

成分：與辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合的抗人M疫球蛋白

TMB底物1瓶，15毫升（黑色瓶蓋）

成分：穩(wěn)定的TMB/H2O2

停止液1瓶，15毫升（白色瓶蓋：無(wú)色溶液）

成分：1M鹽酸

微孔板12x8孔條，帶有可拆卸的微孔

涂覆請(qǐng)參見第1段

檢測(cè)程序：

1. 移液前的準(zhǔn)備

稀釋濃縮試劑：

將濃縮樣本緩沖液按1:5的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加80毫升）。

將濃縮洗滌緩沖液按1:50的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加980毫升）。

樣本：

將血清樣本按1:101的比例用樣本緩沖液（1倍）稀釋

例如：1000微升樣本緩沖液（1倍）+ 10微升血清。充分混合！

洗滌：

每8個(gè)孔準(zhǔn)備20毫升稀釋洗滌緩沖液（1倍），或每96個(gè)孔準(zhǔn)備200毫升

例如：4毫升濃縮液加196毫升蒸餾水。

自動(dòng)洗滌：

考慮設(shè)置儀器和機(jī)器人移液器死體積所需的額外體積。

手動(dòng)洗滌：

將孔中的液體倒空，然后將微孔板倒置在干凈的吸水紙上，用力敲擊以去除液體。向每個(gè)孔中加入300微升稀釋洗滌緩沖液，等待20秒。重復(fù)整個(gè)程序兩次。

微孔板：

計(jì)算測(cè)試所需的孔數(shù)。從框架中移除未使用的孔，放回提供的塑料袋中，與干燥劑一起密封（2-8°C/35-46°F）。

工作流程

有關(guān)移液方案，請(qǐng)參見附錄A，有關(guān)測(cè)試程序，請(qǐng)參見附錄B

我們建議對(duì)樣本和校準(zhǔn)液進(jìn)行雙重移液。

截止校準(zhǔn)液僅用于定性測(cè)試。

● 將100微升每位患者的稀釋血清移入Z定的微孔中。

● 將100微升校準(zhǔn)液或截止校準(zhǔn)液以及陰性和陽(yáng)性對(duì)照移入Z定的孔中。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘。

● 用300微升稀釋洗滌緩沖液（1:50）洗滌3次。

● 向每個(gè)孔中加入100微升結(jié)合物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘。

● 用300微升稀釋洗滌緩沖液（1:50）洗滌3次。

● 向每個(gè)孔中加入100微升TMB底物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下，避免強(qiáng)烈光線照射，孵育30分鐘。

● 按照加入底物的相同順序，向每個(gè)孔中加入100微升停止液。

● 孵育至少5分鐘。

● 輕輕搖動(dòng)板子5秒鐘。

● 在30分鐘內(nèi)讀取450納米（可選450/620納米）處的吸光度。

文獻(xiàn)參考：

1.BergPA,KleinR(1989).Heterogeneityofantimitochondrialantibodies.Seminarsinliverdisease9:103-116.

2.Berg,P.A.,Klein,R.,Lindenborn-Fotinos,J.,Kl?ppel,G.(1982).ATPaseassociatedantigen(M2):markerantigenforserologicaldiagnosisofprimary biliarycirrhosis.Lancet2:1423-1426.

3.MannsM,MeyerzumBüschenfeldeK-H(1989).Prim?rebili?reZirrhose.In:HepatologieundPraxis,MeyerzumBüschenfeldeK-H,ArnoldW,HüttenrothTHeds.GeorgThiemeVerlagstuttgart,NewYork,350-358.

4.CoppelRL,GershwinME(1995).Primarybiliarycirrhosis:Themoleculeandthemimic.ImmunologicalReviews44:17-49.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng)。

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