ALPCO-瘦素ELISA試劑盒用于酶免疫測(cè)定法定量測(cè)定人血清中的瘦素。此套件僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷瘦素ELISA試劑盒（ALP-11-LEPHU-E01）檢測(cè)原理：

以下酶免疫測(cè)定的原理遵循典型的兩步捕獲或“夾心"類型測(cè)定。該測(cè)定利用兩種高特異性的單克隆抗體：一種特異性針對(duì)瘦素的單克隆抗體被固定在微孔板，另一種針對(duì)瘦素不同表位的單克隆抗體與生物素結(jié)合。在第一步中，樣本和標(biāo)準(zhǔn)品中存在的瘦素與固定抗體和生物素標(biāo)記抗體結(jié)合，形成夾心復(fù)合物。通過(guò)洗滌步驟去除過(guò)量和未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗體。第二步中，添加鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶（streptavidin-HRP），它特異性地與任何結(jié)合的生物素標(biāo)記抗體結(jié)合。同樣，通過(guò)洗滌步驟去除未結(jié)合的鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶。接下來(lái)，添加酶底物（TMB），形成與存在瘦素量直接成比例的藍(lán)色產(chǎn)物。通過(guò)添加停止液終止酶促反應(yīng)，將藍(lán)色變?yōu)辄S色。在450納米處的微孔板讀數(shù)器上測(cè)量吸光度。使用一組標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而可以直接讀取樣本和對(duì)照品中瘦素的含量。

瘦素ELISA試劑盒檢測(cè)程序：

所有試劑在使用前必須達(dá)到室溫。校準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本應(yīng)以雙份進(jìn)行檢測(cè)。一旦開(kāi)始程序，所有步驟都應(yīng)連續(xù)完成，不得中斷。

1. 所有試劑盒組分達(dá)到室溫后，輕輕倒置混合。

2. 準(zhǔn)備1X工作濃度的鏈霉親和素-HRP結(jié)合物和洗滌緩沖液。

3. 規(guī)劃微孔板孔，用于校準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本。參見(jiàn)推薦檢測(cè)布局。移除將不使用的條，并將其放回帶有干燥劑的袋子中。重新密封帶有未使用條的袋子，并放回冰箱。

4. 將20 μL每種校準(zhǔn)品、對(duì)照品和血清樣本分別準(zhǔn)確吸入相應(yīng)的孔中，每個(gè)孔雙份。

5. 向每個(gè)孔中加入80 μL單克隆抗瘦素-生物素結(jié)合物。建議使用多通道移液管。

6. 在室溫下，以3毫米直徑的微孔板振蕩器（大約600轉(zhuǎn)每分鐘）孵育1小時(shí)。

7. 使用自動(dòng)微孔板洗滌器（s選）或按以下方法手動(dòng)洗滌微孔板孔。自動(dòng)：使用自動(dòng)微孔板洗滌器，執(zhí)行3周期洗滌，每孔使用300µL 1X工作洗滌緩沖液（3 x 300 µL）。一個(gè)周期包括吸取所有孔，然后用300 µL 1X工作洗滌緩沖液填充每個(gè)孔。在最后一次洗滌周期后，吸取所有孔，然后將微孔板牢固地敲擊在吸水紙上以去除任何殘留液體。手動(dòng)：手動(dòng)洗滌時(shí)，執(zhí)行3周期洗滌，每孔使用300 µL 1X工作洗滌緩沖液（3 x 300 µL）。一個(gè)周期包括通過(guò)迅速清空孔中內(nèi)容物到廢液容器來(lái)吸取所有孔，然后使用多通道移液管向每個(gè)孔中加入300 µL 1X工作洗滌緩沖液。在最后一次洗滌周期后，通過(guò)迅速清空孔中內(nèi)容物到廢液容器來(lái)吸取所有孔，然后牢固地敲擊微孔板以去除任何殘留液體。

8. 向每個(gè)孔中加入100 μL 1X工作鏈霉親和素-HRP結(jié)合物。建議使用多通道移液管。

9. 在室溫下，以3毫米直徑的微孔板振蕩器（大約600轉(zhuǎn)每分鐘）孵育30分鐘。

10. 按照步驟7同樣的方式再次洗滌微孔板孔。

11. 在定時(shí)間隔向每個(gè)孔中加入100 µL TMB底物。建議使用多通道移液管。

12. 在室溫下，以3毫米直徑的微孔板振蕩器（大約600轉(zhuǎn)每分鐘）孵育10-15分鐘。

13. 在與步驟11相同的定時(shí)間隔向每個(gè)孔中加入50 μL停止液。建議使用多通道移液管。輕輕敲擊微孔板框架以混合孔中的內(nèi)容物。

14. 在加入停止液后20分鐘內(nèi)，使用設(shè)定為450納米的吸光度微孔板讀數(shù)器測(cè)量微孔板孔中的光密度（吸光度）。

典型表格數(shù)據(jù)：

僅提供示例數(shù)據(jù)。請(qǐng)勿用于計(jì)算結(jié)果。