DNA甲基化是通過(guò)在胞嘧啶環(huán)的5-碳上共價(jià)添加一個(gè)甲基基團(tuán)（CH3），從而形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。DNA甲基化在調(diào)節(jié)幾乎所有生物過(guò)程中的基因表達(dá)中起著至關(guān)重要的作用，包括發(fā)育、生長(zhǎng)和分化。DNA甲基化的改變已被證明會(huì)導(dǎo)致基因表達(dá)的變化。例如，高甲基化會(huì)導(dǎo)致基因沉默或基因表達(dá)降低，而低甲基化則激活基因或增加基因表達(dá)。異常的DNA甲基化也與疾病的病因有關(guān)，如癌癥、自身免疫性疾病和精神分裂癥。因此，全基因組DNA甲基化分析可以提供有價(jià)值的信息，用于發(fā)現(xiàn)用于疾病診斷的表觀遺傳標(biāo)記，以及用于治療的潛在靶點(diǎn)。

目前，全基因組亞硫酸鹽測(cè)序（WGBS）或簡(jiǎn)化代表性亞硫酸鹽測(cè)序（RRBS）等幾種方法用于全基因組DNA甲基化分析。這些方法將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而5-mC在亞硫酸鹽處理中保持不變。這允許將表觀遺傳差異解釋為遺傳差異，然后可以通過(guò)單堿基分辨率和全基因組范圍內(nèi)的測(cè)序來(lái)檢測(cè)。然而，實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)的傳統(tǒng)方法仍然沒(méi)有實(shí)際應(yīng)用，因?yàn)椋?span style="font-family: Calibri;">1）這些方法需要大量的DNA（>1微克）作為輸入材料，這在從有限的生物樣本（如腫瘤活檢樣本、早期胚胎、胚胎組織和循環(huán)DNA）中制備是困難的；（2）這些方法要求DNA首先被剪切，然后與適配器連接，接著進(jìn)行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化（連接后亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化）。這個(gè)過(guò)程導(dǎo)致大多數(shù)包含在適配器-DNA片段構(gòu)建中的DNA片段斷裂，從而形成單標(biāo)簽?zāi)０澹谖膸?kù)富集中將被移除。因此，在進(jìn)行全基因組亞硫酸鹽測(cè)序時(shí)會(huì)出現(xiàn)不w全覆蓋和偏差；以及（3）這些方法耗時(shí)（2天）。為了克服這些方法的弱點(diǎn)，EpigenTek提供了EpiNext™高靈敏度亞硫酸鹽測(cè)序試劑盒（Illumina）（#P-1056A）。

艾美捷亞硫酸氫鹽測(cè)序試劑盒特點(diǎn)：

創(chuàng)新方法：允許同時(shí)進(jìn)行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化和適當(dāng)大小的DNA片段化。亞硫酸鹽處理后的DNA可以直接連接到適配器，從而消除了通常在使用全基因組亞硫酸鹽測(cè)序（WGBS）和簡(jiǎn)化代表性亞硫酸鹽測(cè)序（RRBS）方法時(shí)發(fā)生的適配器連接片段斷裂的可能性。

快速且流程簡(jiǎn)化的程序：從DNA亞硫酸鹽處理到準(zhǔn)備好的文庫(kù)DNA，整個(gè)過(guò)程可以在6小時(shí)30分鐘內(nèi)完成。

w全轉(zhuǎn)化：將未甲基化的胞嘧啶w全轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（>99%），同時(shí)對(duì)甲基胞嘧啶到胸腺嘧啶的不當(dāng)或錯(cuò)誤轉(zhuǎn)化忽略不計(jì)。

高靈敏度和高效率：創(chuàng)新的亞硫酸鹽DNA適配器連接消除了片段丟失和選擇偏差，使得輸入DNA可以低至0.2納克，非常適合對(duì)珍貴且有限的樣本進(jìn)行甲基化分析。該試劑盒可用于非條形碼（單重）和條形碼（多重）DNA文庫(kù)的準(zhǔn)備。

極其方便：試劑盒包含DNA文庫(kù)準(zhǔn)備每個(gè)步驟所需的所有組分，足夠進(jìn)行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化、連接、清潔、大小選擇和文庫(kù)擴(kuò)增，從而使亞硫酸鹽DNA文庫(kù)準(zhǔn)備流程化，以獲得可靠和一致的結(jié)果。

最小偏差：超高頻（Ultra HiFi）擴(kuò)增能夠以最小的序列偏差和低錯(cuò)誤率獲得可重復(fù)的高產(chǎn)量DNA文庫(kù)。

廣泛的樣本適用性：起始材料可以是來(lái)自各種組織/細(xì)胞樣本的基因組DNA，如新鮮和冷凍組織、培養(yǎng)瓶或微孔板中的培養(yǎng)細(xì)胞、顯微切割樣本、石蠟包埋組織、活檢、胚胎細(xì)胞、血漿/血清樣本以及體液樣本等。來(lái)自各種富集反應(yīng)的DNA，如ChIP、MeDIP/hMeDIP或外顯子捕獲，也可以作為起始材料。

亞硫酸氫鹽測(cè)序試劑盒檢測(cè)原理：

該試劑盒包含了直接使用微量輸入DNA生成的亞硫酸鹽DNA成功制備文庫(kù)所需的所有試劑。在這種制備過(guò)程中，DNA在亞硫酸鹽處理的同時(shí)被轉(zhuǎn)化為適當(dāng)長(zhǎng)度的片段。經(jīng)過(guò)亞硫酸鹽處理的DNA，以單鏈形式存在，隨后同時(shí)轉(zhuǎn)化為雙鏈DNA并連接適配器。連接后的片段使用MQ結(jié)合珠進(jìn)行大小選擇和純化，然后使用高保真度PCR混合液進(jìn)行擴(kuò)增，這確保了從最小量的起始材料中獲得最大產(chǎn)量，并以低錯(cuò)誤率和最小偏差提供了文庫(kù)DNA的高度精確擴(kuò)增。