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初級(jí)會(huì)員 | 第5年

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熒光F-CHP--簡(jiǎn)便、敏感和特異性檢測(cè)

時(shí)間:2024/3/12閱讀:217
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CHP在三維膠原培養(yǎng)中展示了癌細(xì)胞蛋白酶水解引起的細(xì)胞周基質(zhì)轉(zhuǎn)換過(guò)程,而不需要使用合成熒光基質(zhì)和基因修飾細(xì)胞。CHP可以在分子水平上檢測(cè)和定位膠原組織的機(jī)械損傷。CHP還可以用于評(píng)估脫細(xì)胞胞外基質(zhì)的膠原損傷。CHP可在SDS-PAGE凝膠中特異性地顯示膠原條帶,而無(wú)需進(jìn)行western轉(zhuǎn)印。

 

CHP通過(guò)與SDS變性的膠原鏈進(jìn)行三螺旋雜交,并在電泳過(guò)程中加熱,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)SDS-PAGE凝膠中膠原帶的簡(jiǎn)便、敏感和特異性檢測(cè)[1]。簡(jiǎn)單的程序消除了對(duì)western blot的需要(例如,蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜和阻斷),節(jié)省了時(shí)間,精力和材料。

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艾美捷熒光F-CHP直接在SDS-PAGE凝膠中可靠地測(cè)量I型膠原蛋白的稀釋系列,并檢測(cè)到含有少至5ng蛋白質(zhì)的條帶()。CHP可識(shí)別多種膠原類型(),由于其中性和親水性,對(duì)ECM()和細(xì)胞裂解液()中的非膠原分子沒有親和力。

 

Typhoon Imager 熒光成像記錄(λex: 488 nm). 圖片參考文獻(xiàn)[1] .

 

此外,CHP可用于替代不成功的膠原抗體或常規(guī)膠原染色檢測(cè)高度變性組織中的膠原蛋白[1]。 下圖顯示了完-全加熱的豬韌帶切片中完整的膠原含量,通過(guò)F-CHPB-CHP可見(進(jìn)一步通過(guò)酶標(biāo)NeutrAvidin檢測(cè))。CHP染色對(duì)膠原蛋白的特異性比傳統(tǒng)的膠原蛋白染色(Sirus Red)更高,后者依賴于膠原蛋白結(jié)合的正電荷,可以對(duì)其他堿性氨基酸含量高的蛋白質(zhì)進(jìn)行非特異性染色[2]。

 

熒光F-CHP文獻(xiàn)參考:

1.Direct detection of collagenous proteins by fluorescently labeled collagen mimetic peptides. Bioconjugate Chemistry(2013)

2.Sirius red and acid fuchsin staining mechanisms. Biotechnic & Histochemistry (1998) 73, 7177.

 


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