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細胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認為包括基因工程技術(shù)、細胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。
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Hs852.T人黑色素瘤細胞
關(guān)于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。
這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。
關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題。
個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性塑料瓶相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比塑料瓶內(nèi)好。這可能是因為塑料瓶比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在塑料瓶這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。
所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),塑料瓶比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,塑料瓶會好一點,比如剛剛復(fù)蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。
Hs852.T人黑色素瘤細胞
消化/傳代。
1、移去MEF培養(yǎng)基
2、用5ml不含鈣鎂離子的PBS洗滌細胞(以去除胰蛋白酶的抑制物)。
3、每個培養(yǎng)瓶里加入1.5ml的胰蛋白酶/EDTA(0.05%的胰蛋白酶),消化5min。
4、為了使細胞分散開,輕輕吹打細胞。
5、每加入1ml的胰蛋白酶/EDTA,加入至少1ml的MEF培養(yǎng)基以終止胰蛋白酶的消化。
6、將細胞懸液加入到15ml的錐形管中,吹打幾次,使細胞分散為單個的。
7、在新的T75培養(yǎng)瓶中加入10mlMEF培養(yǎng)基。
8、將細胞懸液分裝到新的T75培養(yǎng)瓶中,放在37℃培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
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