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細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。
杭州仟諾生物科技有限公司 |
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更新時(shí)間:2024/07/29 19:56:13瀏覽次數(shù):1343
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HEKTE永生化上皮細(xì)胞
注意事項(xiàng)如下:
1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2 對(duì)于貼壁細(xì)胞,若細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;如細(xì)胞還不貼壁,將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。
3 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和本公司技術(shù)部溝通交流。
我們?nèi)娜鉃槟?wù),提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,保障售后服務(wù),真心把客戶奉為上帝,及時(shí)處理客戶訂單,全程跟蹤貨源,采用誠(chéng)信快遞運(yùn)輸,認(rèn)真解答客戶疑問,對(duì)客戶售后問題,不拖沓,不推卸責(zé)任,認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度。
細(xì)胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境
一、無菌室
無菌室的結(jié)構(gòu):一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。
無菌室的消毒和防污染:為保持無菌狀態(tài),經(jīng)常消毒是必要的,通常采用每日(使用前)紫外照射(1-2小時(shí)),每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸(2小時(shí))和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。實(shí)際工作中,要根據(jù)無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。
此外,還應(yīng)注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括:送入無菌室的風(fēng)沒有被過濾除菌;進(jìn)出無菌室時(shí),能使外界空氣直接對(duì)流進(jìn)無菌室的操作間;等。
二、超凈工作臺(tái)
工作原理:鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣通過高效過濾器得以凈化,凈化的空氣被徐徐吹過臺(tái)面空間而將其中的塵埃、細(xì)菌甚至病毒顆粒帶走,使工作區(qū)構(gòu)成無菌環(huán)境。根據(jù)氣流在超凈工作臺(tái)的流動(dòng)方向不同,可將超凈工作臺(tái)分為側(cè)流式、直流式和外流式三種類型。
超凈臺(tái)的使用與保養(yǎng):超凈臺(tái)的平均風(fēng)速保持在0.32-0.48米/秒為宜,過大、過小均不利于保持凈化度;使用前開啟超凈臺(tái)內(nèi)紫外燈照射10-30分鐘,然后讓超凈臺(tái)預(yù)工作10-15分鐘,以除去臭氧和使用工作臺(tái)面空間呈凈化狀態(tài);使用完畢后,要用70%酒精將臺(tái)面和臺(tái)內(nèi)四周擦拭干凈,以保證超凈臺(tái)無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺(tái)。
第四節(jié) 常用培養(yǎng)器皿及清洗消毒
細(xì)胞培養(yǎng)需要大量消耗性物品,如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類、紙類等,因此掌握清洗、消毒知識(shí),學(xué)會(huì)清洗、消毒方法是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作必須的。
一、清洗 離體條件下,有害物質(zhì)直接同細(xì)胞接觸,細(xì)胞對(duì)任何有害物質(zhì)十分敏感,極少殘留物都可以對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒副作用。因此,新的或重新使用的器皿都必須認(rèn)真清洗,達(dá)到不含任何殘留物的要求。
(一)玻璃器皿的清洗 一般經(jīng)過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個(gè)步驟。
1、浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡,軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡(jiǎn)單刷洗,然后用5%鹽酸浸泡過夜;用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂,干涸后不易刷洗掉,故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。
2、刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中,用軟毛刷反復(fù)刷洗。不要留死角,并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干,備浸酸。
3、浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中,又稱酸液,通過酸液的強(qiáng)氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質(zhì)。浸酸不應(yīng)少于六小時(shí),一般過夜或更長(zhǎng)。放取器皿要小心。
4、沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗,浸酸后器皿是否沖洗的干凈,直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿,每件器皿至少要反復(fù)“注水-倒空”15次以上,最后用重蒸水浸洗2-3次,晾干或烘干后包裝備用。
(二)橡膠制品清洗
新的橡膠制品洗滌方法:0.5mol/L NaOH煮沸15分鐘,流水沖洗,0.5mol/L HCl煮沸15分鐘,流水沖洗,自來水煮沸2次,蒸餾水煮沸20分鐘,50℃烤干備用。
(三)塑料制品的清洗
塑料制品特點(diǎn):質(zhì)軟、易出現(xiàn)劃痕;耐腐蝕能力強(qiáng)、但不耐熱。
清洗程序:使用器皿后立即用清水清洗,浸于自來水過夜,用紗布或棉簽和50℃清洗液刷洗,流水沖洗,晾干,浸于清潔液15分鐘,流水沖洗(15-20遍),蒸餾水浸洗三次,雙蒸水泡24小時(shí),晾干備用。
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