如何更好的對優(yōu)等胎牛血清進行儲存與解凍?
優(yōu)等胎牛血清解凍:將血清從冰凍區(qū)中取出后(切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀),先置于2~8℃區(qū)域中使之融化,然后在室溫下使之全融。使用前再預溫到將使用的溫度(如37℃),但必須注意的是,解凍過程中應輕輕地搖晃均勻。
如何儲存和解凍優(yōu)等胎牛血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。
我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
優(yōu)等胎牛血清是從適合人類衛(wèi)生習慣的農(nóng)場收集的。有時,也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供體牛血清。在細胞培養(yǎng)中,血清供應了豐富的高分子蛋白,低分子量營養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時,血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護細胞的作用。在細胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清,主要根據(jù)基礎培養(yǎng)基化學成分,培養(yǎng)細胞的類型和培養(yǎng)體系而定。
熱滅活的目的是為了去除血清中的補體等對熱敏感的物質(zhì),但是在優(yōu)等胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。
研究人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達成年動物血清的1-3%,而其它補體成分僅有成年動物的5-50%,至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗,我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。
因此,優(yōu)等胎牛血清在大部分的細胞培養(yǎng)中是不需要滅活的,但在免疫學研究中,培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。