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A3 人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定介紹

A3亞克隆來(lái)自Jurkat細(xì)胞系。用Fas抗體處理Jurkat細(xì)胞，用有限稀釋法獲得一個(gè)細(xì)胞系，此細(xì)胞系對(duì)Fas介導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生自發(fā)抗性的比例較低。得到的亞克隆對(duì)Fas-介導(dǎo)的凋亡十分敏感。挑選對(duì)新霉素具有抗性的野生型A3細(xì)胞，并三次用移碼突變誘變劑ICR-191進(jìn)行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷的隱性突變體。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：T細(xì)胞白血病，T淋巴細(xì)胞

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞，懸浮生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

A3 人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀(guān)察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后di一次傳代建議1：2傳代 。        

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

每2至3天添加一次新鮮培養(yǎng)基（取決于細(xì)胞密度），換液可以通過(guò)添加新鮮培養(yǎng)基或更換培養(yǎng)基來(lái)維持?；蛘?，可以通過(guò)離心來(lái)維持，隨后以3至5×105個(gè)活細(xì)胞/ mL重新懸浮于新鮮培養(yǎng)基中。保持細(xì)胞濃度在2×105和2×106活細(xì)胞/ mL之間。

1，收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議客戶(hù)凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面以T25瓶為類(lèi)，

1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一、原代細(xì)胞服務(wù)
       各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源；
       多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源；
       原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等；
       原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)；

二、細(xì)胞株/系服務(wù)
       細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)；
       細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)；
       細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等；

三、iPS細(xì)胞
       iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層在）；
       iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)；
       新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估；

四、技術(shù)外包服務(wù)：各類(lèi)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、顯微鏡拍照服務(wù)等

五、其他：根據(jù)客戶(hù)需要定制服務(wù)等