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發(fā)酵罐在滅菌的時候需要注意什么

 

發(fā)酵罐操作與滅菌技術   常用的滅菌技術一般分為；物理滅菌和化學滅菌。物理滅菌又包括濕熱滅菌、干熱滅菌、射線滅菌法和過濾滅菌等。而化學滅菌主要是使用化學試劑（如甲醛、苯酚、新潔爾滅、過氧乙酸、高錳酸鉀等）進行某些容器或物料以及無菌區(qū)域的滅菌。在生物發(fā)酵方面，常用的設備是機械攪拌式發(fā)酵，其殺菌效果的好壞直接影響到發(fā)酵是否能正常進行。由于工業(yè)操作的特點，發(fā)酵罐滅 菌普遍采用濕熱滅菌法。  一．小型發(fā)酵罐操作和酵母菌培養(yǎng)  實驗室所使用的小型通氣攪拌發(fā)酵罐具有體積小，耗電少，不宜染菌，單位時間、單位體積的生產力高，代謝放出熱量易于移去，操作控制和維修方便等特點，因此能較好的滿足微生物的生長和代謝的需要。 1.設備和材料  1L發(fā)酵罐、5L發(fā)酵罐、50L發(fā)酵罐、一套空氣除菌系統(tǒng)、供檢查無菌用的肉湯培養(yǎng)基和裝置。 2.發(fā)酵罐操作步驟 2.1發(fā)酵罐的清洗  發(fā)酵罐使用前后都應認真清洗，特別是前后兩次培養(yǎng)采用不同的菌株時，更應注意清洗和殺菌工作。  發(fā)酵罐內可進行清洗的任何部分都應認真清洗，否則都可能成為雜菌的滋生地。易被忽略而不能充分清洗的地方有噴嘴角內部與取樣管內以及罐頂?shù)忍帯?2.2 種子培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件  蛋白胨10g，葡萄糖40g，蒸餾水100ml，pH自然。500ml三角瓶裝液量100ml，115℃，滅菌20min。  培養(yǎng)條件：用接種環(huán)從保存斜面中接一環(huán)至三角瓶中，150r/min，28℃，搖瓶培養(yǎng)48h。  2.3 發(fā)酵罐的組裝工作  ① 連接好冷卻水管。若采用自來水冷卻，連接部要充分牢固，并且注意連接管管徑與自來水管管徑一致，盡可能采用耐壓管。  ②由于通入的空氣有一定壓力，應注意連接壓縮空氣的管子應能承受一定壓力。 

 

③安裝pH及溶解氧等檢測裝置，注意各接線口不要出現(xiàn)差錯。由于操作過程要和水打交道，故線路連接一定要注意安全，要特別注意防止漏電。 2.4 發(fā)酵罐滅菌  ① 排氣管為玻璃管，內裝有棉花，以保證蒸汽能自由出入發(fā)酵罐，同時不會出現(xiàn)染菌現(xiàn)象。  ② 取樣口上連接一段硅膠管，在硅膠管上安裝節(jié)流夾，以防止培養(yǎng)基在滅菌是流出。  ③ 裝入發(fā)酵罐溶積60%的培養(yǎng)基（成分同種子培養(yǎng)基）后，將發(fā)酵罐放入滅菌釜內，在115℃下，滅菌20min。當滅菌完成后，溫度降到60℃以下時，打開滅菌釜，確認發(fā)酵罐上所連接的管路完好后，將罐去除。盡快將通氣管接好，確認排氣口正常后，以0.3-0.5L/min通入空氣。接通冷卻水管路，開攪拌在低速下進行培養(yǎng)基的冷卻。 2.5   取樣與分析方法  自培養(yǎng)操作開始起，每3h取一次樣。取樣時，將取樣管口流出的初15ml左右培養(yǎng)液作為廢液，取隨后流出的培養(yǎng)液10ml，在OD505下測定吸光度。所得數(shù)值基于已制得的菌體量與吸光度之間的曲線，換算出菌體濃度。 二  發(fā)酵菌的空消技術  1 發(fā)酵罐的清洗  打開罐底排污閥，用冷水沖洗罐壁，如壁內壁有沉積物，操作人員必須下罐進行人工鏟除，否則易包藏雜菌成為污染源。進罐清洗必須兩人進行，一人進罐清洗，一人在外監(jiān)護。同時與罐體相連的取樣管道，進料管道，排污管道及有關閥門都要通水沖洗干凈，通以沸水，以提高洗滌效率，洗完后蓋上入孔蓋。  ① 發(fā)酵罐空消操作  ② 打開罐頂各排汽閥，開三路進汽（罐底、風管、取樣管）。  ③ 開始時，蒸汽以下進上出為主，蒸汽由罐底和風管進入，由罐頂所有排汽閥排出冷空氣。在蒸汽排出時，即關閉各閥門，稍開排汽閥，當罐壓上升到1.5-2.5kgf/cm2(1kgf/cm2=98.0665kpa)時，開罐頂各排汽閥，排汽歷時 15-20min，蒸汽改為上進下出為主，即關閉底部蒸汽閥，關小進風管汽閥，蒸汽主要從取樣管進，連消進料管進入，空消過程中蒸汽應將兩只大罐間倒種管道、壓料進風管道、接種管道以及各排汽閥打開，排汽消毒（兩個沖視鏡閥開啟短暫時間即可）。