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外包服務 高爾基染色
高爾基染色(含多層染色)
一.實驗步驟
1、取材固定:將老鼠殺死后,立刻取腦組織置于4%的多聚甲醛液中固定24h以上。
2、高爾基染色:用生理鹽水將腦組織輕輕漂洗幾遍,將需要的實驗部位切成2-3mm厚的腦組織塊,高爾基染液將腦組織塊*浸沒,放置陰涼通風處避光處理14天,浸泡48h后,換一次新染液,之后每隔3天換一次新染液。
3、組織塊脫水:將組織塊取出,置于15%的蔗糖溶液中4℃且避光條件下脫水約1天,取出組織塊,置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光條件下脫水2天。
4、顯影:將組織塊取出,蒸餾水洗1min,濃氨水處理45min,蒸餾水洗1min,定影液處理45min,蒸餾水洗1min。
5、脫水冰切封片:置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光條件下脫水2-3天,冰凍切片100um,甘油明膠封片,拍照保存結果。
6、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
二、結果判讀:
神經(jīng)元呈黑色,膠質(zhì)細胞呈黑色,背景灰色或者棕黃色。
三、注意事項:
1、染液配制的量需要根據(jù)實際情況來定,配制過多易造成浪費。
2、染液一定要避光保存,并且實驗過程中的每一步操作都要求避光。
3、染色完成后,若客戶需要返還組織塊,將剩余組織塊放在30%的蔗糖中4℃避光運輸。
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