美國NOVA 西尼羅河病毒核酸試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

感染西尼羅病毒可引起包括腦炎在內的一系列臨床癥狀，西尼羅病毒（WNV）是一種潛在的嗜神經病毒，它可引起人群中無癥狀的感染或者是發(fā)熱。人或動物的感染zui初在西半球并無證實，直到1999年在紐約*爆發(fā)了該疾病，自此以后，該疾病擴散至美國的其他地方，到2003年，該疾病在46個國家發(fā)生，并且引起超過9800人發(fā)病，大多數西尼羅感染者無任何癥狀，小部份人可能發(fā)展為包括發(fā)熱﹑頭痛﹑身體疼痛﹑皮膚發(fā)疹﹑淋巴結腫大在內的輕微的臨床癥狀，在臨床上，人西尼羅病毒感染引起的發(fā)熱是具有自限性的急性發(fā)熱性疾病，伴頭痛﹑肌肉酸痛﹑多發(fā)性關節(jié)痛﹑發(fā)疹﹑胃腸道癥狀和淋巴結炎。少于1％的感染者發(fā)展成嚴重的疾病，包括腦炎和腦膜炎。

目前診斷西尼羅河病毒的主要方法學是：ELISA、PCR方法。

我司代理的美國NOVA公司的West Nile Virus ELISA Kit在美國、歐洲、亞洲等地都得到行業(yè)內的*好評。NOVA公司位于美國的加利福尼亞州，該公司自2002年創(chuàng)立以來一直在研發(fā)和銷售人類傳染病的檢測試劑盒。主要包括：登革、瘧疾、西尼羅河、黃熱病、裂谷熱等等。檢測方法有：膠體金法、酶聯免疫法、核酸PCR方法。

我司還提供其它進口或國產試劑盒：登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌、化妝品檢測、食品安全檢測等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。

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【美國NOVA 西尼羅河病毒核酸試劑盒】

用途

西尼羅(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會導致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學指標，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構成。

實驗的原理

檢測西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

• 微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被結合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

• IgG樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
• IgG陰性質控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
• IgG陽性質控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
• 洗滌液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。
• EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
• 酶聯物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
• TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。
• 終止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

試劑應避免反復凍融。

操作步驟

在使用前將所有試劑和樣品平衡至室溫，并輕輕倒轉使其充分混勻。

實驗準備：

將10X的濃縮洗滌液稀釋,將120ml的濃縮洗滌液加上1080ml的蒸餾水，搖勻，至無任何沉淀，稀釋好的洗滌液zui多可在室溫下放置兩個星期。

準備實驗所需的板條，剩余的板條應盡快放入袋子里重新密封，在2－8℃下儲存至保質期。

操作步驟：

• 標記將要使用的板條，注意微孔板已經按照統(tǒng)一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質控抗原。

• 將血清樣品﹑陰性質控和陽性質控同樣地用樣品稀釋液按1：300稀釋。
• 每孔加入50ul稀釋后的樣品，以下為一個血清樣品使用一個板條的*。

• 封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
• 溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。
• 在每孔中加入50ul的酶聯物。
• 封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
• 溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。
• 每孔加入150ul的EnWash，在室溫下溫育5分鐘
• 溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。
• 每孔加入75ul的TMB底物液。
• 封板，在室溫下，避光處溫育10分鐘。
• 每孔加入50ul的終止液終止反應。
• 在450nm處讀取吸光率。

結果的計算

結果的變化將會非常大，以下結果僅供指引。

計算ISR值：

計算在同一實驗里WNR抗原的兩個陰性質控的平均值，計算同一實驗里NC抗原的兩個陰性質控的平均值，用WNRA/NCA，得出陰性質控的ISR值。同樣地計算陽性質控和樣品得ISR值，陽性質控的ISR值應高于3.0，陰性質控的ISR值應低于1.5。

結果的判斷：

在某些特殊的例子中，曾報道有假陽性，但對梅毒病人無限制。假如樣品的ISR值大于2.0，但是WNRA和NCA的OD值均偏低，可視為潛在假陽性。以下為樣品1排除標準的范例。

排除標準：

計算陰性質控的WNRA和NCA值：

平均WNRA=0.260/2=0.130

     NCA=0.236/2=0.118

     ISR=0.130/0.118=1.10

任何陰性質控的ISR值高于1.5，則實驗需要重做。

計算陽性質控的WNRA和NCA值：

平均WNRA=1.290/2=0.645

     NCA=0.368/2=0.184

     ISR=0.645/0.184=3.5

任何陽性質控的ISR值低于3.0，則實驗需要重做。

以下標準是必需遵守的，不滿足以下標準，試劑出現了質量問題或操作錯誤，實驗需重做。

解釋結果

1. 樣品的ISR值大于3.0視為陽性。

2. 陽性結果需重做證明。

3. 樣品的ISR值小于2.0視為陰性。

4. 樣品的ISR值小于3.0但是大于2.0，視為未確定，但是很有可能陽性，實驗需一式三份重做。

5. ISR值大于2.0是因為WNRA和NCA的值都低造成的，應該視為潛在假陽性。

樣品1低OD值的范例：
計算樣品的WNRA和NCA值：

平均WNRA=0.060/2=0.030

     NCA=0.026/2=0.013

     ISR=0.030/0.013=2.31

雖然樣品的ISR值高于2.0，但是本樣品需視為假陽性，因為其OD值低，而且遠遠偏離了相關的標準品，這通常在空白值高的情況下發(fā)生。

要進一步證實樣品，所有陽性的結果都要用6，2層析稀釋滴定法重做，與相同滴定法的陰性質控相比較，假如曲線是？？的，平的或者是波浪型的曲線，則表明為假陽性的結果。

實驗的局限性

• 樣品的OD值高于抗原質控（非WNRA）,導致ISR值小于3.0，則可能為假陰性，再釋稀樣品重新實驗，可能會獲得真正的ISR值。
• 既然這不是一個直接檢測的方法，則需考慮假陽性和假陰性存在的可能性。
• 所有有反應的樣品，應用確定性實驗來證實。
• 本實驗提供的試劑，盡可能地檢測血清或血漿中的WNRA反應性抗體水平。
• 應避免反復凍融樣品和試劑。
• 不要使用溶血或脂血的樣品，它們會導致錯誤的結果。

【美國NOVA 】

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