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那些年對ELISA試劑盒選擇的困惑
閱讀：812 發(fā)布時間：2021-9-2“隔壁的實驗室又發(fā)文章了，我們困在處理數(shù)據(jù)這一環(huán)，這幾家的試劑盒檢測數(shù)據(jù)怎么都不一樣？"小編每當聽到這句話，每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學者表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測數(shù)據(jù)不一樣的原因，除了一些實驗操作、實驗環(huán)境等客觀因素外，還有試劑盒質量參數(shù)，如重復率、批內差、批間差、線性區(qū)間、準確度（回收率）等。但是，最重要的影響因素可能是作為定量標尺的標準品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的差異和關于標準品的幾點疑惑。
定量ELISA試劑盒如何進行校準？
利用國際機構的參考試劑進行校準
目前，定量ELISA試劑盒校準方法為應用NIBSC/WHO推薦的參考試劑（reference reagent）對試劑盒的定量單位進行校準。例如，WHO Reference Reagent，Islet Cell Antibodies， NIBSC code: 97/550。其單位規(guī)定為：每安瓿為20單位胰島細胞抗體（Islet cell antibodies）；或每安瓿為100單位抗GAD65；或每安瓿為100單位抗IA-2。
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精準定量的基石之一：嚴格標準品生產(chǎn)
市售ELISA試劑盒的檢測指標呈多樣化態(tài)勢，至今已知的測定項目種類雖遠遠多于NIBSC/WHO推薦的參考試劑，但只有嚴格遵守參考試劑的定量單位所生產(chǎn)的標準品（如前文提到的英國國家生物制品檢定所NIBSC提供的參考試劑）才是生產(chǎn)高質量定量ELISA試劑盒的前提條件之一。但是不同廠商的技術路線和品控標準不同，會導致成品的性能存在差異，進而造成檢測數(shù)據(jù)的差異。RSR公司的自身抗體ELISA檢測試劑盒在標準品生產(chǎn)中每個環(huán)節(jié)，嚴格監(jiān)控是否符合以NIBSC參考試劑定標的質控范圍，因此保證售出的RSR試劑盒定量準確，高特異性，結果可重復性高。
精準定量的基石之二：高度純化重組蛋白
目前，國內外的雙抗原夾心法ELISA試劑盒所用抗原大多數(shù)屬于純化的重組蛋白抗原，競爭法ELISA則更加多樣化，既可能為純化的重組蛋白抗原，也可能為天然蛋白抗原提取物。對此，有些實驗者擔憂試劑盒中的抗原為何不使用天然蛋白，重組蛋白是否會影響檢測結果？ELISA試劑盒選擇純化重組蛋白為抗原的主要原因：
第一，天然蛋白均存在于復雜的生物樣本中，大多數(shù)在細胞或組織中表達量可能極少，不適于進行高度純化或者純化成本高昂，無法獲得大量的天然蛋白。
第二，為保證ELISA試劑盒檢測中抗體和抗原的特異性結合，在研究之初，通過篩選不同重組蛋白，使樣本中的抗體與重組蛋白抗原間的親和力和特異性達到最佳。
第三，隨著蛋白表達和純化技術的發(fā)展，高度純化的重組蛋白和天然蛋白具有很高的活性相似度，特別是采用真核細胞表達系統(tǒng)，如酵母或昆蟲細胞等，高度純化的重組蛋白具有更接近自然狀態(tài)的空間構象和生物活性。
精準定量的基石之三：科學生物樣本驗證
隨著國內生物技術的發(fā)展，自主研發(fā)蛋白表達純化、抗體制備等ELISA試劑盒開發(fā)技術也在不斷進步。除了應用NIBSC/WHO推薦的參考試劑對試劑盒進行校準外，也可用一些暫無機構認可，但背景信息完整的生物樣本進行驗證。按照科學研究方法，采用不同種屬、性別、生命周期階段、種類等因素的生物樣本分別進行驗證。
如何正確使用ELISA試劑盒的標準品？
ELISA試劑盒的標準品需要與其他試劑盒主要組分和待測樣本達到相同實驗條件。請?zhí)崆?/span>30分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(20-25℃)，如果試劑盒需分多次使用，請僅取出本次實驗所需的酶標板條和試劑，剩余板條和試劑需按照條件保存。
RSR ELISA試劑盒的標準品可直接使用，無需現(xiàn)用現(xiàn)配，且保存條件與試劑盒一致即可。
RSR研發(fā)總部
