化工儀器網(wǎng)
技術文章
默瑞生物推出--RPA引物、探針設計服務
閱讀：1631 發(fā)布時間：2022-11-252006年Piepenburg等研發(fā)的重組酶聚合酶擴增技術（recombinase polymerase amplification，RPA），該技術可以在37~42 ℃條件下實現(xiàn)待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優(yōu)點，特別適用于基層和現(xiàn)場即時檢測。
RPA反應由3種關鍵酶（重組酶Uvs X、單鏈結(jié)合蛋白Gp32以及鏈置換DNA聚合酶）、能量供應體系（三磷酸腺苷、磷酸肌酸以及肌酸激酶）、穩(wěn)定反應體系（Tris、醋酸鉀、高分子量聚乙二醇以及二硫蘇糖醇等）、三磷酸脫氧核糖核苷酸（deoxyribonucleotide triphosphate，dNTP）、醋酸鎂等成分組成。
RPA技術反應原理
RPA反應基本原理如下圖，主要包含5個階段：
（1）在三磷酸腺苷供能的條件下，重組酶輔因子（Uvs Y）協(xié)助Uvs X與反應體系中的引物結(jié)合，形成酶-引物復合體，該復合體在反應體系中尋找雙鏈DNA同源序列［3］；
（2）在同源序列處發(fā)生鏈交換反應形成D環(huán)結(jié)構，同時Gp32與被置換的DNA單鏈結(jié)合進一步穩(wěn)定D環(huán)結(jié)構；
（3）Uvs X從酶-引物復合體中解離，DNA聚合酶識別引物游離的3′-OH端，添加dNTPs啟動擴增反應；
（4）模板母鏈分離，DNA子鏈合成；
（5）兩DNA子鏈合成完畢。該過程不斷循環(huán)實現(xiàn)檢測靶標的指數(shù)擴增直到反應體系中能量消耗殆盡。
重組酶聚合酶擴增反應原理圖
影響RPA擴增的關鍵因素：引物和探針設計
目前，仍沒有一款專用的軟件可供用戶設計RPA反應所需的引物和探針。RPA引物、探針設計對RPA反應有重要影響，RPA引物長為30~35個堿基，不同引物、探針組合有不同的擴增效率，為達到實驗預期，進行多次篩選是必要的。探針堿基錯配將影響擴增效率，出現(xiàn)假陽性結(jié)果并總結(jié)了熒光檢測法探針的要點（熒光基團與淬滅基團之間1~2個堿基，盡可能降低G含量等）。
默瑞生物推出RPA引物/探針設計服務
基于多年來默瑞生物對Twistdx RPA相關產(chǎn)品的市場推廣工作，我們有多年豐富經(jīng)驗的技術服務團隊。應廣大科研工作者的實際需求，推出以下服務項目。
客戶可根據(jù)自己需求填寫提供信息（表1），并選擇如下以下服務方案（表2）：
表1：
| RPA檢測方法 | |
| Basic（普通電泳法）、 | |
| exo（熒光定量法） | |
| fpg（熒光定量法） | |
| nfo（試紙條法） | |
| 檢測靶標信息 | |
| 序號 | 物種名稱 | 基因名稱 | 基因信息（NCBI登錄號） | 靶序列信息 |
表2：
| 方案 | 靶標 | 引物 | 探針 | crRNA | 設計周期 |
| 1 |
| 1周 | |||
| 2 |
|
| 2周 | ||
| 3 |
|
|
| 3周 | |
| 4 |
|
|
|
| 4周 |
方案1：甲方提供物種名稱，乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息（NCBI登錄號）、靶標基因序列信息；并出具電子版靶標基因序列信息報告一份；
方案2：甲方提供物種名稱，乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息（NCBI登錄號）、靶標基因序列信息，同時乙方針對該靶點設計出三對引物供甲方篩選，并出具電子版引物信息報告（含引物特異性分析）；
方案3：甲方提供物種名稱，乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息（NCBI登錄號）、靶標基因序列信息，同時乙方針對該靶點設計出三對引物和一條探針供甲方篩選，并出具電子版引物信息報告（含引物特異性分析）；
方案4：甲方提供物種名稱，乙方提供該物種的診斷靶標基因名稱、基因信息（NCBI登錄號）、靶標基因序列信息，同時乙方針對該靶點設計出三對引物、一條探針和三條相對應的CRISPR-RNA（crRNA）供甲方篩選，并出具電子版引物信息報告（含引物特異性分析）；
方案5：甲方提供物種名稱，乙方提供全套的RPA或RPA-CRISPR技術服務，包括診斷靶標的基因篩選、引物和探針的設計、特異性和靈敏度實驗驗證、實際樣品檢測及驗證等。
交貨期：自合同生效之日起3個月內(nèi)。默瑞生物。
默瑞生物
默瑞生物創(chuàng)立以來，已經(jīng)陸續(xù)導入TwistDx，enzymatics，KAPA BIOSYSTEMS，BioDynami，Jackson，Echelon，ChromoTek，Nanocs，Biotechrabbit，Lee Biosolutions, magtivio等優(yōu)質(zhì)國際品牌，逐步培育成為專業(yè)用戶的選擇。
產(chǎn)品包含核酸和蛋白兩大產(chǎn)品線。
(1)核酸產(chǎn)品線提供從樣品破碎儀，核酸質(zhì)控，核酸電泳，凝膠成像，到質(zhì)粒純化Kit，快速內(nèi)切酶，T4 DNA連接酶，PCR Mix等，給您的核酸研究工作帶來方便快捷全新的體驗。
(2)蛋白產(chǎn)品線提供從樣品處理到蛋白定性，定量，到蛋白Mark，封閉液，PBS，化學發(fā)光成像儀，產(chǎn)品做到很好，追求好的客戶體驗，是我們的理念。
代理儀器產(chǎn)品有：Leica顯微系統(tǒng)，Merck Millipore實驗室純水超純水儀及配套耗材，Roche實時定量PCR儀，Partec流式細胞儀等。
代理試劑產(chǎn)品有：TwistDx恒溫擴增試劑盒，Echelon脂類研究試劑，KAPA BIOSYSTEMS二代測序試劑， Enzymatics二代測序酶，Jackson ImmunoResearch抗體，ChromoTek熒光蛋白及抗體，Horizon Discovery測序標準品，Biomatik公司Elisa試劑盒，Nanocs PEG修飾劑，Spectrumlabs透析袋，Polysciences微球，JenaBioscience分子試劑，Lifespan Technologies硫酸葡聚糖ELISA試劑盒及抗體，Lee Biosolutions抗體，Emfret心血管研究抗體，Magtivio B.V.DNA提取磁珠，Biontex Laboratories轉(zhuǎn)染試劑，Canvax™細胞凋亡檢測試劑盒，Matriks Biotek®生物藥物檢測試劑盒，Immunostep流式細胞術抗體，F(xiàn)uller Laboratories感染性疾病檢測試劑盒，SICGEN抗體，biotechrabbit酶及抗體等。