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技術(shù)文章

默瑞生物TwistDx試劑盒又來現(xiàn)貨了,需要訂購的請速速聯(lián)系我們小瑞

閱讀:1896          發(fā)布時間:2020-3-20

默瑞生物TwistDx試劑盒又來現(xiàn)貨了,需要訂購的請速速聯(lián)系我們小瑞,手慢無?。?/strong>

 一個月內(nèi),學(xué)術(shù)期刊連發(fā)兩篇論文!上半年引爆生物圈的華人科學(xué)家張鋒教授團隊又有新動作!這次,他在一月內(nèi),分別在《Nature》、《Science連發(fā)兩篇論文!他將CRISPR-Cas13a改造成了靈敏度達到了阿摩爾級(aM,10的負(fù)18次方摩爾每升),可以檢測單分子的SHERLOCK技術(shù)。而這其中,RPA起到了不小的作用。

那么,什么是RPA呢?

RPA,即重組酶聚合酶擴增技術(shù),是在由多種酶和蛋白的參與下,在恒溫條件下實現(xiàn)核酸指數(shù)擴增的技術(shù),被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,反應(yīng)溫度在37°C左右。

RPA的反應(yīng)原理

RPA的反應(yīng)過程,首先是重組酶與引物結(jié)合,形成蛋白-DNA復(fù)合物。接著在dsDNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成,對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。而被替換的DNA鏈與SSB單鏈DNA結(jié)合蛋白結(jié)合,防止進一步被替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非??欤话憧稍谑昼娭畠?nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

QQ截圖20171101131255.jpg 

RPA與相關(guān)技術(shù)的比較

與PCR實驗相比,RPA實驗?zāi)茉诤愣囟认逻M行全程實驗,沒有復(fù)雜的操作,對儀器及人員的要求不高,適合基層或現(xiàn)場快速診斷。

QQ截圖20171101131303.jpg 

而另一種新興技術(shù),LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名為“環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)”,由于其簡便的操作,也被視為PCR技術(shù)強有力的競爭者。在此,讓我們對比下LAMP與RPA兩種試劑盒進行的實驗:

 

LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫擴增)試劑盒

RPA試劑盒

主要組分

鏈置換DNA聚合酶

重組酶;單鏈結(jié)合蛋白;鏈置換DNA聚合酶

適反應(yīng)溫度

60-65

37-40

推薦反應(yīng)時間

40min左右

20min左右

引物數(shù)

2

1

保存形式

液體

凍干粉;液體

檢測方式

熒光目視;比濁法實時濁度儀

電泳;試紙條;熒光定量

擴增產(chǎn)物可否用于下游應(yīng)用

可否Multiplex/多重反應(yīng)

缺點

氣溶膠,易產(chǎn)生假陽性

價格高 

上月,RPA 技術(shù)的開發(fā)公司——英國TwistDx Inc商務(wù)總監(jiān)Tony Hill來到了我公司,為我們深入介紹了RPA技術(shù),及TwistDx的各類產(chǎn)品。

QQ截圖20171101131317.jpg

Tony還與我公司的技術(shù)人員一同拜訪上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院及上海閱爾基因技術(shù)有限公司,分別向趙凱研究員及其研究生,以及閱爾基因的研究人員介紹了RPA 技術(shù),解答他們在使用中遇到的問題。

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 英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過突破等溫DNA擴增,開發(fā)的重組酶聚合酶擴增技術(shù)(RPA),被譽為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。

TwistDx以此技術(shù)為基礎(chǔ)生產(chǎn)的核酸擴增類產(chǎn)品,能在恒定且較低的溫度下,僅用10~20分鐘,進行單分子核酸檢測。這一技術(shù)對環(huán)境、硬件設(shè)施的要求很低,對于生物防護、水體檢驗、食品檢驗、醫(yī)療診斷、微流體、獸醫(yī)等方面都有良好的應(yīng)用。

RPA擴增的各種體系試劑盒中,含有DNARNA擴增所需的所有試劑,研究者只要準(zhǔn)備好引物和模板就行了。擴增結(jié)果可以分別通過凝膠電泳檢測、熒光定量檢測或試紙條檢測,產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

QQ截圖20171101131335.jpg 

默瑞(上海)生物科技有限公司與英國TwistDx公司達成戰(zhàn)略合作,負(fù)責(zé)RPA技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品在中國大陸地區(qū)的推廣。

默瑞(上海)生物科技有限公司(Morey Biosciences ,Inc .簡稱默瑞生物)成立于2016年7月22日,于8月1日正式運營,其前身是一家具有15年代理銷售生命科學(xué)儀器的專業(yè)公司。默瑞生物以此為經(jīng)營理念。默瑞擁有兩個產(chǎn)品部,儀器部和試劑部。

儀器部主要代理產(chǎn)品有:Leica顯微系統(tǒng),Merck Millipore實驗室純水超純水儀及配套耗材,Roche實時定量PCR儀、核酸純化,Beckman流式細胞儀、離心機,IKA桌面小儀器,Lonza 細胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng),Miele清洗機,Tecan酶標(biāo)儀、液體工作站等。

試劑部主要代理產(chǎn)品有: TwistDx恒溫擴增試劑盒,Echelon酯類研究試劑,Jackson ImmunoResearch抗體,MTI-GlobalStem細胞轉(zhuǎn)染試劑,ChromoTek標(biāo)簽抗體, Horizon Discovery測序標(biāo)準(zhǔn)品和細胞,Enzymatics二代測序酶, Biomatik公司Elisa試劑盒,BiosPacific抗體抗原,bioWORLD植物生長劑,Nanocs PEG修飾劑,Spectrumlabs透析袋,Brighter Ideas熒光蛋白,Lumiprobe熒光染料,Polysciences微球,Emfret心血管疾病研究抗體, Iduron糖胺聚糖產(chǎn)品,JenaBioscience分子試劑,eENZYME病毒研究工具等。

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