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微生物菌種實驗原理

    霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，而且孢子很容易飛散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片其特點是：(a)細胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間；(c)溶液本身呈藍色，有一定染色效果。

實驗設備

    無菌吸管，載玻片，蓋玻片，U形棒，解剖刀，玻璃紙，濾紙等。

實驗材料

    曲霉（Aspergillussp．），青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．），毛霉（Mucor sp．）；

實驗步驟

1．一般觀察法

    于潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。

2．載玻片觀察法

    (1)將略小于培養(yǎng)皿底內徑的濾紙放入皿內，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數套（根據需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好，用1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌，備用。

    (2)將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后，用無菌解剖刀切成0．5—1cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內的載玻片上，每片上放置2塊。

    (3)用滅菌的尖細接種針或裝有柄的縫衣針，?。ㄈ庋鄯侥芸匆姷模┮稽c霉菌孢子，輕輕點在瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上，再蓋上皿蓋。

    (4)在培養(yǎng)皿的濾紙上，加無菌的20％甘油數毫升，至濾紙濕潤即可停加。將培養(yǎng)皿置28℃培養(yǎng)一定時間后，取出載玻片置顯微鏡下觀察。

3．玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法

    (1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水，洗下孢子，制成孢子懸液。

   (2)用無菌鑷子將已滅菌的、直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養(yǎng)基平板上。

   (3)用1ml無菌吸管吸取0．2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻。

   (4)微生物菌種置28℃溫室培養(yǎng)48小時后，取出培養(yǎng)皿，打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開，再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上，用顯微鏡觀察。
*        100克    普通肉湯培養(yǎng)基
*    RT，避光    10克    菌種保存培養(yǎng)基
*        100克    溶血瓊脂基礎
*    2～8℃，避光    100克    改良羅氏培養(yǎng)基基礎
*        100克    碳酸氫鈉瓊脂基礎
*    RT，避光    25克    MiddleBrook 7H11瓊脂
*    RT，避光    25克    假單胞分離瓊脂
*        100克    液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）
*        25克    霉菌培養(yǎng)基
*        25克    堿性膽鹽瓊脂
微生物菌種