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大鼠elisa試劑盒酶標(biāo)板的問(wèn)題
閱讀:262 發(fā)布時(shí)間:2018-10-9 大鼠elisa試劑盒分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以 采 用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量量愈多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。做了十多次的ELISA,能夠得到線性比較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線,但是同樣濃度的標(biāo)準(zhǔn)品每次的OD值都不一致,樣品就更加慘不忍睹了,除了酶標(biāo)板之外,其余封閉蛋白,抗體,抗體稀釋度,等等條件都已經(jīng)更換過(guò),但是問(wèn)題還是沒(méi)能解決,懷疑是酶標(biāo)板的問(wèn)題。求教各位高手,有什么方法可以快速驗(yàn)證酶標(biāo)板的可靠性。
一般來(lái)說(shuō),國(guó)外的是沒(méi)有問(wèn)題的。同時(shí)你還要看一下說(shuō)明書中ELISA試劑盒的靈敏度,如果你的樣品濃度低于該檢測(cè)下限,則無(wú)法檢測(cè)到,這是很正常的現(xiàn)象,并不是非要每個(gè)樣品都要測(cè)出值才可以。
其次每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)曲上同一濃度樣品的OD值不一樣是很正常的,這與抗原抗體反應(yīng)體系、作用時(shí)間、顯色時(shí)間等等一系列的因素有關(guān)。鑒定該ELISA體系是否可靠,zui關(guān)鍵的指標(biāo)是加標(biāo)回收率和稀釋線性,如果你懷疑的話可以做一下。