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如何測(cè)定大鼠elisa試劑盒操作?
閱讀:239 發(fā)布時(shí)間:2018-9-11 大鼠elisa試劑盒測(cè)定現(xiàn)一般為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定形式,測(cè)定操作十分簡(jiǎn)略,一般涉及到標(biāo)本的搜集保留、試劑預(yù)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果判別和成果陳述及解釋等方面,其間任一過(guò)程的不妥都會(huì)影響測(cè)定成果,且尤以加樣、溫育和洗板等過(guò)程為甚。
ELISA試劑盒要思考以下幾個(gè)方面:
(1)要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有相似過(guò)氧化物的活性,因而,在以HRP為符號(hào)酶的人ELISA試劑盒測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡(jiǎn)單在溫育過(guò)程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。
(2)樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所排泄的一些酶也許會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定辦法發(fā)生非特異性干擾。
(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離,則可以在2~8℃下保留一星期,如為有菌操作,則主張冰凍保留。樣本的長(zhǎng)時(shí)刻保留,應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保留的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果,然后引起假陰性成果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,重復(fù)倒置混勻即可。
(5)標(biāo)本在保留中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉積后取上清檢查。