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筆者認為此環(huán)節(jié)是微生物菌種培養(yǎng)的中心環(huán)節(jié)，也是重要的環(huán)節(jié)。培養(yǎng)菌種嚴格按照操作規(guī)程，注意每個細節(jié)。
1、空氣過濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管要一起提前滅菌，建議在空氣過濾器和接入培養(yǎng)罐的硅膠管間安裝一個逆止閥，防止培養(yǎng)液倒流，這是很關(guān)鍵的，否則培養(yǎng)時因為內(nèi)外壓力差變化，培養(yǎng)液容易回流。
2、監(jiān)測菌種純度。這一步是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，此步驟將直接決定你的成敗，監(jiān)測不好可能會導(dǎo)致全軍覆沒。監(jiān)測菌種純度有以下幾種方法：
①看：看培養(yǎng)液是否透明澄清，菌球是否均勻。培養(yǎng)液不能渾濁。用試管或錐形瓶，從下面接出少量液體（注意，一定要在大火焰的保護下進行），觀察菌球是否懸浮，不能在短時間內(nèi)下沉或上浮。
②聞：聞放氣閥處是否有菌絲的純香，不能是其他酒精味、酸味甚至惡臭，要回辨別霉菌和細菌感染時不同的氣味。
③顯微鏡觀察：顯微鏡觀察一些霉菌的特征，平時可以將已經(jīng)確定的液體菌拿來觀察練習(xí)，借助一些教材，對比觀察，這是經(jīng)驗累積才能確定的，但也是*的。顯微鏡具體使用方法本論壇有介紹。
④培養(yǎng)監(jiān)測：這一步是簡單也是直觀的，直接反應(yīng)了該菌種是否純凈。具體操作如下：提前做好試管或錐形瓶瓊脂培養(yǎng)基，并提前做好滅菌工作，再用此小錐形瓶或試管，在培養(yǎng)罐的下面放料處，接少量的培養(yǎng)液（這一步兩人操作，一個人負責(zé)火焰保護，一個人負責(zé)接液體），整個過程在火焰的保護下塞上棉塞。傾斜放置，讓部分瓊脂露出培養(yǎng)液。控制溫度，1～2天即可觀察，霉菌和細菌都可以盡收眼底，如果有感染，培養(yǎng)罐全體培養(yǎng)液應(yīng)及時放棄，否則后果很嚴重。
    接種環(huán)節(jié)
    首先確保微生物菌種純凈且旺盛的前提下，再討論接種環(huán)節(jié)。接種也是液體菌種較為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，因為菌種含水量大，操作中很容易感染空氣中的雜菌。我把我的接種方法透露一下，希望對您有幫助。接種操作：五人一組，每一組一把接種槍，五個酒精燈。一個人專門負責(zé)接種槍的把握注射菌種，其余四人負責(zé)打開袋口（菌袋用無棉蓋封口，便于操作）。每人面前一個酒精燈，酒精燈火焰一定要大，大到可以包圍無棉蓋口。接種時，在火焰上打開蓋口，在火焰上接種，接完后，在火焰上蓋上蓋口，整個環(huán)節(jié)要迅速，否則火焰要把菌袋燒壞。接種槍在沒有用的時候?qū)⒄麄€槍頭放在火焰上，避免在空氣中放置。整個操作環(huán)節(jié)保險度*，對接種室的滅菌要求不高。

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