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原基組織脫毒法說明
閱讀:593 發(fā)布時間:2017-5-16微生物菌種該技術(shù)zui大程度革除了原有組織分離時子實(shí)體處于生長中后期,攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端,真正實(shí)現(xiàn)了分離組織的脫毒目的。
具體操作為: 常規(guī)配制基料,調(diào)破氮比為30∶1。碳氮比不可小于25∶1,以免菌絲過度旺盛生長結(jié)成菌皮,不易現(xiàn)原基。大口罐頭瓶洗凈、備用。準(zhǔn)備數(shù)塊又11厘米×11厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時,從瓶口處鋪上一層紗布,用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下,使之緊貼瓶劈。封口滅菌、接種、培養(yǎng)等操作按常規(guī)進(jìn)行。待菌絲發(fā)滿瓶后,施行溫差、濕差、光照等刺激,一般約7天即可現(xiàn)出原基。此時原基的形態(tài)是白疙瘩 。待原基高至1厘米時,即可進(jìn)行脫毒分離。 將微生物菌種瓶用75%酒精擦洗后,移入已消毒的接種箱,箱內(nèi)不再進(jìn)行常規(guī)熏蒸。同時準(zhǔn)備接種針(或接種釣)、多個刀片(以備交替使用),與菌瓶一同放入接種箱中,噴灑新潔爾滅以確保無菌操作。兩手用75%酒精擦洗,伸入接種箱,將刀片進(jìn)行灼燒滅菌后手持冷卻。打開菌瓶封口,兩手配合用無菌鑷子取出原基。由于料面覆蓋一層紗布,故不會將基料帶出,操作方便。用刀片將原基表層削去約1毫米,然后用尖刃刀片將原基劃切,使每塊大小1毫米2左右。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。
微生物菌種操作要點(diǎn):一是用刀片進(jìn)行削、切時,每切一刀須更換一次刀片;二是分離塊接入時須靠邊緣投放,可接在平板的邊緣或試管的zui前部,一般不居中接入。