背景資料:Chromosome 9 consists of about 145 million bases and 4% of the human ome and encodes nearly 900 es. Considered to play a role in der determination, deletion of the distal portion of 9p can lead to development of male to female sex reversal, the phenotype of a female with a male X,Y otype. Hereditary hemorrhagic
產品名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
C9orf7抗體 | 50ul 100ul 200ul | Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. |
產品分類:抗體 / 一抗
英文名稱:C9orf7
中文名稱 9號染色體開放閱讀框7抗體
英文別名 C9orf7; Calcium channel flower homolog; Chromosome 9 open reading frame 7; D9S2135; FLOWR_HUMAN; RP13-100B2.5.
交叉反應:Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Rabbit
標記: Unconjugated
抗體來源: Rabbit
抗體類型: Polyclonal
免疫原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human C9orf7
蛋白細胞定位: 細胞膜
純化方法: affinity purified by Protein A
亞型 IgG
性狀: Liquid
濃度: 1mg/ml
儲存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件: Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏佐劑和弗氏不佐劑
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。
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抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
標記法:
直接標記法 | 間接標記法 |
抗體的準備:取提純的Ig溶液測定蛋白質含量,置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液,冰槽中攪拌5~10min; 熒光素的準備:按每毫克蛋白質加0.01~0.02mg的FITC計算,準確稱取后加入抗體溶液中; 標記:邊攪拌邊加入熒光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰庫繼續(xù)攪拌12~18h; 透析:結合完畢后,先將結合物以3000r/min離心20min,除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩沖鹽的燒杯中透析過夜; 過柱:取透析過夜的標記物,過葡聚糖凝膠G-25或G-50柱,分離游 | 抗體的準備:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS將待標記的抗體蛋白溶液稀釋到濃度為30~40mg/ml,置于三角燒瓶內放入冰槽中; 熒光素的準備:按每毫克蛋白質加入0.01mg的熒光素稱取,溶解于等量的3%重碳酸鈉水溶液中;將抗體蛋白溶液與FITC溶液等量混合,在0~4℃中攪拌18~24h,充分攪勻; 透析或過柱層析。 |
實驗步驟:
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。
② 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩。
④ 取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+"表示:
(-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++"以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。
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