MTS細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒公司*的產(chǎn)品：載脂蛋白C4抗體低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體廣泛存在蛋白1抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體α1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1緊張素Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體膜粘連蛋白2受體抗體血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體α-1抗胰抗體

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：MTS細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒

英文名稱：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：500次

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

ADCK1蛋白抗體

酰基合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體

α/β水解酶4抗體

ADCK2蛋白抗體

乙醛脫氫酶16家庭A1抗體

粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

乙醇脫氫酶1抗體

δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體

肌索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體

α2巨球蛋白抗體

ACCSL蛋白抗體

甲胎蛋白抗體

β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體

星形肌動(dòng)蛋白抗體

系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體

磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體

磷酸化系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體

接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體

磷酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體

膜粘連蛋白7抗體

3號(hào)染色體開放閱讀框15抗體

載脂蛋白B受體抗體

三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體

10X Taq Buffer with KCl    4x1.25 ml

10X Reaction Buffer with MgCl2 for DNase I    1 ml

50X TAE Buffer (Tris-acetate-EDTA)    1 l

10X TBE Buffer (Tris-borate-EDTA)    1 l

10X Taq Buffer without Detergent    4x1.25 ml

10X Buffer BamHI, Lsp1109I    5x1 ml

10X Buffer BfuI    1 ml

10X Reaction Buffer for phi29 DNA Polymerase    5x1 ml

10X DreamTaq™ Buffer    4x1.25 ml

10X T4 DNA Ligase Buffer    1.5 ml

10X DreamTaq™ Green Buffer    4x1.25 ml

10X Buffer B    5x1 ml

10X Buffer G    5x1 ml

10X Buffer O    5x1 ml

10X Buffer R    5x1 ml

10X Buffer Tango™    5x1 ml

Pyrophosphatase, Inorganic    10 units

FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase    1000 units

FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase    5x1000 units

FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase    300 units

T4 Polynucleotide Kinase    500 units

T4 Polynucleotide Kinase    2500 units

T4 DNA Ligase    1000 units

T4 DNA Ligase    5x1000 units

T4 DNA Ligase, HC    5000 units

T4 DNA Ligase    200 units

MTS細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒 DNA Ligase, LC    2x500 units

T4 RNA Ligase    1000 units

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)