商品介紹:
英文名稱:Rapamycin 產(chǎn)品規(guī)格:10mg|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg Rapamycin是一種特異性的mTOR抑制劑,IC50為0.1nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):53123-88-9 別名:Sirolimus 純度:98.98% 分子量:914.17 Rapamycin結(jié)構(gòu)式 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
mTOR抑制劑(Rapamycin) | Rapamycin | 10mg|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
抗生鏈霉菌間粘附分子1抗體Human ERp19 ELISA Kit兔子促卵泡(FSH)免疫試劑盒
燕麥鐮孢CD105抗體Human ESAM(Endothelial cell-selective adhesion molecule) ELISA Kit兔子促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒
木賊鐮孢軸突蛋白5抗體Human ESCO2 ELISA Kit兔子雌二(E2)免疫試劑盒
空氣藤氏酵母轉(zhuǎn)錄因子COUP1抗體Human ESD ELISA Kit兔子腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒
玫瑰黃鏈霉菌表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白1抗體Human ESF1 ELISA Kit兔子層連蛋白/板層(LN)免疫試劑盒
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌癌胚抗原相關(guān)粘附分子1抗體Human ESPN ELISA Kit兔子不對(duì)稱二甲基精(ADMA)免疫試劑盒
靈芝19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框75抗體Human ERGIC3 ELISA Kit兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)免疫試劑盒
厭鹽假諾卡氏菌隱花色蛋白1抗體Human ERH ELISA Kit兔子補(bǔ)體蛋白5(C5)免疫試劑盒
大腸埃希菌隱花色蛋白2抗體Human ERI1 ELISA Kit兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒
異常畢赤酵母鈣通道L型α2多肽抗體Human ERLIN2 ELISA Kit兔子表皮生長(zhǎng)因子(EGF)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌松球亞種L型電壓依賴型鈣通道β3(L-type Ca++ CPβ3)抗體Human Erlin-1(ERLIN1) ELISA Kit兔子白血病抑制因子受體(LIFR)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌L型電壓依賴型鈣通道β4抗體Human ERMAP ELISA Kit兔子白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒
聚生殼菌電壓依賴性鈣通道CACNA1G+CACNA1H抗體Human ERMP1 ELISA Kit兔子白介9(IL-9)免疫試劑盒
迪吉氏黃桿菌鈣結(jié)合蛋白1抗體Human ERCC6 ELISA Kit兔子白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
中國(guó)臺(tái)灣芽孢桿菌神經(jīng)型一氧化氮合成結(jié)合蛋白抗體Human ERCC6L ELISA Kit兔子白介6(IL-6)免疫試劑盒
病研所芽孢桿菌蕈堿型乙酰受體M4抗體Human ERG ELISA Kit兔子白介4(IL-4)免疫試劑盒
沼澤考克氏菌Kocuria│palustris 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTAR DNA結(jié)合蛋白43試劑盒麥芽糖
爪哇根霉Rhizopus│javanicus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,植物激級(jí)s腺苷同型半胱試劑盒3-O-沒(méi)食子酰粘
核盤(pán)菌Sclerotinia│sclerotiorum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRSyndecan-3/試劑盒木犀草-5-O-葡萄糖苷
mTOR抑制劑(Rapamycin)枯草芽孢桿 3-苯基酰肝生長(zhǎng)因子Elisa
杰丁畢赤酵母 (S)-(-)-環(huán)氧基肝脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa
嗜角蛋落霉 替扎尼定肝脂Elisa
粉紅聚端孢霉 3,4-二甲氧基肉桂酸干擾誘導(dǎo)T趨化因子Elisa
粉紅單端孢 2,6-二甲氧基苯酸干擾誘導(dǎo)蛋白10Elisa
短波單胞屬 二甲基二甲氧基硅烷干擾誘導(dǎo)蛋白10Elisa
無(wú)花果曲霉 乙酰酮鑭干因子Elisa
硫磺(硫色多孔) 二苯基二甲氧基硅烷高分子量激肽原Elisa
大腸埃希氏 間三氟甲基肉桂酰高密度脂蛋白Elisa
黑木耳 二異丁基氫化鋁高密度脂蛋白2Elisa
白僵 2--5-(三氟甲基)苯甲高密度脂蛋白3Elisa
產(chǎn)黃青霉 N6-苯甲?;?5′-O-(4,4′-二甲氧基三苯基)-2′-脫氧腺苷高密度脂蛋白膽固Elisa
尖孢鐮刀西瓜?;?/span> 去甲勞丹堿鹽酸鹽高遷移率族蛋白B1Elisa
簡(jiǎn)青霉 4'-氟-3'-甲氧基苯乙酮睪酮Elisa
大腸埃希 一二乙基鋁谷氨酸Elisa