商品介紹:
本品Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對細(xì)胞的毒性較低。 Hoechst 33258染色常用于細(xì)胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色。 Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm,大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長為352nm,大發(fā)射波長為461nm。 Hoechst 33258溶于水,溶解度可達(dá)10mg/ml。用于細(xì)胞核染色時,推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。 CAS:23491-45-4 分子式:C25H24N6O·3HCl 分子量:533.88 儲存條件:-20℃避光,有效期一年。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
免疫球蛋白A(IgA)英文名稱:IgA ELISA Kit磷化促腎上腺皮質(zhì)激ACTH抗體包裝25mg
輪狀病毒(RV)抗原(Ag)英文名稱:Ag ELISA Kit磷化蛋白激AKT1抗體包裝25g
卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)英文名稱:OVA sIgG ELISA Kit磷化蛋白激B抗體包裝1g
卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)英文名稱:OVA sIgE ELISA Kit磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝100g
卵泡抑(FS)英文名稱:FS ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白a1抗體包裝25g
硫氧化還原蛋白(Trx)英文名稱:Trx ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝1g
硫氧還蛋白還原(TrxR)英文名稱:TrxR ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝250mg
磷脂酰絲(PS)英文名稱:PS ELISA Kit性神經(jīng)酰1抗體包裝1g
磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)英文名稱:PI Ab-IgG/IgM ELISA Kit粘附調(diào)節(jié)分子1抗體包裝1g
磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)英文名稱:GPC-3 ELISA Kit氣味結(jié)合蛋白抗體包裝5g
磷脂D2(PLD2)英文名稱:PLD2 ELISA Kit乙脫氫2抗體包裝1g
磷脂A2(PL-A2)英文名稱:PL-A2 ELISA Kit膜粘連蛋白10抗體包裝1g
磷脂肌3激(PI3-K)英文名稱:PI3-K ELISA Kit前梯度同源蛋白2抗體包裝250mg
磷腺苷(cAMP)英文名稱:cAMP ELISA Kit乙脫氫5抗體包裝100g
磷烯式羧激(PCK)英文名稱:PCK ELISA Kit通用轉(zhuǎn)錄因子IIA樣因子抗體包裝25g
ATP結(jié)合蛋白家族7抗體免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
Hoechst 33258細(xì)胞藍(lán)色熒光染料白僵 2,3-二甲氧基成熟促進(jìn)因子檢測試劑盒
卡卡杜兒玉氏酵母 苯甲酰甲酸甲酯成纖維活化蛋白檢測試劑盒
釀酒酵母 氨基乙硫酸氫鹽成纖維生長因子檢測試劑盒
黑曲霉 4-嗎啉成纖維生長因子10檢測試劑盒
阿穆爾斯克灣鹽地桿 磷酸三聚成纖維生長因子19檢測試劑盒
簇生離褶傘 4-氨基-2-羥基嘧啶-5-羧酸乙酯成纖維生長因子21檢測試劑盒
蓋囊側(cè)耳 4-溴-5-氯-2-氟甲苯成纖維生長因子23檢測試劑盒
草類芽孢桿 2,6-二溴吡啶-4-羧酸程序性死亡分子-1檢測試劑盒
鍺栓孔 甘氨酸亞鐵程序性死亡配體-1檢測試劑盒
平菇 3-甲基-2-(4-)丁酸穿孔蛋白1檢測試劑盒
群結(jié)腐霉 5-溴-1H--3-甲垂草扁桃酸檢測試劑盒
非食用色素俾士麥棕對照液 (4-甲氧苯基)肼垂體中葉素檢測試劑盒
毛柄(金針菇) 4-氯-5-甲基-2氨基嘧啶雌二檢測試劑盒
釀酒酵母 4-溴-3-羥基苯甲雌檢測試劑盒
白耙齒 4-硝基-1,3-苯二硫酸鹽雌受體檢測試劑盒