以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
新型活細(xì)胞核酸染料( Ex/Em:647/660 nm, bound to DNA)是一種具有細(xì)胞膜透性的核酸染料,其在于核酸結(jié)合之后熒光強(qiáng)度會(huì)得到顯著增強(qiáng)。Nuclear View Red 活細(xì)胞核酸染料可以用于染死的或者活的真核細(xì)胞的RNA 和DNA,在革蘭氏細(xì)菌中同樣也適用。新型活細(xì)胞核酸染料具有如下重要特性: 細(xì)胞膜透性,可以穿過(guò)幾乎所有的細(xì)胞膜,包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)菌。 極低的熒光背景,未與核酸結(jié)合時(shí),染料的量子產(chǎn)率通常<0.01。 與核酸結(jié)合之后,量子產(chǎn)率通常> 0.4。 活細(xì)胞核酸染料可以在不同的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中染活細(xì)胞或者固定細(xì)胞的核酸,能夠與配備了常規(guī)激光激發(fā)器或?qū)拵д彰鞴庠吹母鞣N熒光檢測(cè)設(shè)備匹配。 佳的染色探針濃度取決于不同的應(yīng)用程序類型,此處建議的初始條件是基于驗(yàn)證的特定細(xì)胞類型,具體實(shí)驗(yàn)中應(yīng)摸索加以調(diào)整。 儲(chǔ)存:-20℃,有效期六個(gè)月。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
普魯雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pantoprazole Sodium無(wú)胸腺癥相關(guān)蛋白DGCR6/迪格奧爾格綜合征關(guān)鍵基因6抗體包裝5g
鹽羅格列雜質(zhì)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fasudil hydrochloride朊蛋白DPL抗體包裝100mg
鹽羅哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fasudil hydrochloride肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良蛋白激抗體包裝1g
鹽羅哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rhodionin有絲分裂控制蛋白dis3抗體包裝1g
鹽羅哌右旋體(鹽羅哌雜質(zhì)B)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rhodiosin肝癌新基因3蛋白抗體包裝5g
鹽羅通定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dideoxyinosine;DidanosineDapper2蛋白抗體包裝25g
鹽洛美沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Icariin I; Icariside IDapper3蛋白抗體包裝5g
鹽馬尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Baohuoside II背神經(jīng)管核蛋白抗體包裝1g
鹽馬普替林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sophoricoside雙基精解1抗體包裝25g
鹽嗎啉胍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sophoricoside絲/蘇蛋白激DCAMKL1抗體包裝5g
鹽美金剛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methylophiopogonanone A 唐氏綜合征粘附分子抗體包裝25g
鹽美利曲辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methylophiopogonanone B磷脂磷HTPAP抗體包裝5g
鹽美司坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7,2-Dihydroxy-3,4-Dimethoxyisoflavan穿膜蛋白DLK1抗體(C端)包裝25g
鹽美西律(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3-Hydroxy-9,10-Dimethoxypterocarpan二氫葉還原樣1抗體包裝5g
鹽咪達(dá)普利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oroxyloside脫氧尿苷三磷DUT抗體包裝1g
: 3alvar.2B.3339資源名稱: 乙型副傷寒沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品同型半胱試劑盒松脂二葡萄糖苷;Pinoresinol
繩索狀芽孢桿菌Bacillus│funiculus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR鐵-過(guò)氧化物岐化試劑盒棗仁皂苷B;Jujuboside B
黏著海桿菌Marinobacter│adhaerens 質(zhì)量規(guī)格:>99%以上,S-構(gòu)型無(wú)結(jié)晶鐵調(diào)25試劑盒棗仁皂苷A;Jujuboside A
活細(xì)胞核染料(紅)葉生布勒擔(dān)子酵母 雜氮雙環(huán)磷酸酯葡糖氨基聚糖Elisa
谷氨酸棒桿 3-乙?;?6-氯咪唑并[1,2-B]噠多配體聚糖-1Elisa
大腸埃希氏 抗氧劑 LK-1081Ras三磷酸鳥苷激活樣蛋白Elisa
柔嫩艾美耳球蟲 2-氯-4-肼血管抑Elisa
Methylobacterium variabile 3-乙氧基苯酸吡啶并林Elisa
金耳 2,3-二甲氧基磷脂酰肌抗體Elisa
DB (彌漫大B瘤) (通過(guò)STR鑒定) 8-氨基-6-甲氧基喹啉抗磷脂酰絲氨酸凝血原復(fù)合物IgG抗體Elisa
炭疽芽胞桿 聚乙烯肉桂酸酯抗磷脂酰絲氨酸凝血原復(fù)合物IgM抗體Elisa
*蛹蟲草 肉堿富馬酸鹽凝血IgG抗體Elisa
離中不粘柄 3-氯-5-氟芐凝血IgM抗體Elisa
海洋沉積物芽孢桿 3,5-二氟苯布魯氏桿IgG抗體Elisa
彎曲假單胞 N-甲基-3-氟芐布魯氏桿IgM抗體Elisa
果生鏈核盤 (3S,4S)-1-芐基吡咯烷-3,4-二布魯氏桿IgA抗體Elisa
芽胞桿 2-羥基-2-甲基-N-[4-基--3-(三氟甲基)苯基]-3-[4-(氟苯基)硫]酰B瘤因子3Elisa
生黑鏈霉 1,2-環(huán)氧-2-甲基-N-[4-基--3-(三氟甲基)苯基]-烯酰肝配蛋白A1Elisa