商品介紹:
用途: 退行性染色液,適用于石蠟切片染色 注意事項(xiàng): Gill No.3蘇木素染色液又稱GillⅢ液,為正常濃度的2倍,石蠟切片染色大于15分鐘。屬于半氧化蘇木素,比Harris蘇木素穩(wěn)定,染色需鹽酸乙醇分化,其缺點(diǎn)是:黏附的明膠甚至玻片也會(huì)染色。 儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
土貝母苷乙英文名稱: Arbutin組織相關(guān)抗原HLA-B15抗體包裝25g
土鱉蟲(地鱉)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sanguinarine chloride蛋腺苷轉(zhuǎn)移抗體包裝5g
土鱉蟲(冀地鱉)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Secoisolariciresinol Diglucoside磷化絲裂原活化的蛋白激p38β抗體包裝100ml
土大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aminomalonic acid 磷化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體包裝25ml
土大黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: AZD-4547粘蛋白-5B抗體包裝5g
土茯苓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zineb粘蛋白-3抗體包裝1g
土槿皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Wilforine雞馬立克氏病火雞皰疹病抗體包裝1g
土荊芥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neogambogic acid多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體(C端)包裝5g
土荊皮(金錢松)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diosgenin glucoside硝唑抗體包裝25g
土荊皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-p-CouMaroyltyraMine;Paprazine黑色瘤相關(guān)抗原4抗體包裝5g
土荊皮乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bergenin鈣結(jié)合蛋白39抗體包裝10g
土壟大白蟻巢(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bergenin線粒體抗病信號(hào)MAVS蛋白抗體包裝50g
土木香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Palmatine hydrochloride巨噬集落激因子受體抗體包裝1g
土木香內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Palmatine hydrochloride腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
土牛膝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phellodendrine chloride粘蛋白4抗體包裝5g
纖維堆囊菌Sorangium│cellulosum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品卷曲螺旋, 肌球蛋白樣BCL2 結(jié)合蛋白/自噬基因Beclin 1試劑盒常山乙;Febrifugine
粘帚霉Gliocladium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>85%,二BR卷曲蛋白8試劑盒車葉草苷;Asperuloside
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品聚集蛋白試劑盒草;Oxalic acid
Gill蘇木素染色液(Gill No.3)棱蓋多孔 4--2,8-雙(三氟甲基)喹啉綠色熒光蛋白Elisa
梨黑斑鏈格孢 3--4-甲酸美金剛Elisa
樟疫霉 2',4'-二甲氧基苯乙酮錳超氧化物歧化Elisa
貝倫格勒座腔梨?;?/span> N-((S)乙氧羰基-1-丁基)-(S)-氨酸糜蛋白Elisa
釀酒酵母 4-(4-氨基苯基)啉-3-酮球蛋白AElisa
Phoma medicaginis var. medicaginis 基環(huán)己基環(huán)己球蛋白DElisa
松乳菇 (S)-(-)-1-(3-甲氧苯基)乙球蛋白EElisa
黃蓋蜜環(huán) (S)-3-二甲基氨基-3-苯球蛋白GElisa
粉狀畢赤氏酵母 O-叔丁基-L-蘇氨酸球蛋白G1Elisa
黑絡(luò)丸 8-氨基萘磺酸球蛋白G2Elisa
釀酒酵母 3-溴鄰苯二甲酸酐球蛋白G2aElisa
枯草芽孢桿 5-溴-2-三氟球蛋白MElisa
平臍蠕孢 N-磺酸丁基吡啶硫酸氫鹽繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管Elisa
根瘤 3-吡唑-4-甲酸乙酯膜聯(lián)蛋白-A2Elisa
枯草芽孢桿 肉桂,順式+反式末端補(bǔ)體復(fù)合物Elisa