商品介紹:
CPI-360是一種有效的選擇性EZH2抑制劑,作用于wt EZH2和Y641N EZH2時(shí),IC50分別為0.5nM和2.5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1802175-06-9 純度:97.21% 分子量:437.53 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
EZH2抑制劑(CPI-360) | CPI-360 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
金耳人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2Anti-PPP3CB Antibody人Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(Nfkbie)
變異短波單胞菌小鼠組蛋白H2bAnti-PPP4R2 Antibody人Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(Nfkbie)
橄欖色盤多毛孢大鼠激M2型同工Anti-PPP4R1L Antibody人ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)
糞鏈球菌人抑瘤MAnti-PPP2R3C Antibody人ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)
羊肚菌小鼠血管內(nèi)皮粘附分子1Anti-PRDM1 Antibody人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因
黑曲霉小鼠糖皮質(zhì)類固受體Anti-PRAF2 Antibody人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因
中國(guó)臺(tái)灣根霉人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白DAnti-PRDM1 Antibody人孕和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)
長(zhǎng)雙歧桿菌長(zhǎng)亞種大鼠γ基丁Anti-PPRC1 Antibody人孕和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)
細(xì)孢毛霉小鼠黃體生成釋放激Anti-PRDM12 Antibody人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)
大腸桿菌大鼠5羥色Anti-PRIM1 Antibody人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)
真姬菇人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CAnti-PRIM1 Antibody人絲蛋白抑制因子肽抑制因子進(jìn)化枝3G(Serpina3g)
紫色鏈霉菌人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白BAnti-PRKACA Antibody人絲蛋白抑制因子肽抑制因子進(jìn)化枝3G(Serpina3g)
費(fèi)希爾曲霉大鼠P物質(zhì)受體Anti-PRIM1 Antibody人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因
產(chǎn)氣莢膜梭菌 A型小鼠腦紅蛋白Anti-PRKACB Antibody人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因
蕓薹生鏈格孢人表面活性蛋白AAnti-PRKAG2 Antibody人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因
皺褶青霉小鼠8異前列腺Anti-PRKACG Antibody人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因
扭轉(zhuǎn)原腸胚形成同源蛋白1抗體黑根須腹菌人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
蛋白酪磷樣N前體蛋白抗體正紅菇貓淋巴瘤細(xì)胞
TUB蛋白抗體馨生棒孢LC-2/ad 人肺腺癌細(xì)胞
味覺(jué)受體蛋白家族2亞基16抗體麥斑點(diǎn)附球霉KPL-4 人乳腺癌細(xì)胞
EZH2抑制劑(CPI-360)彎孢 N-乙酰-L-異亮
產(chǎn)紫青霉 L-酪乙酯
松生擬層孔 D-天冬二甲酯鹽酸鹽
球形賴芽孢桿 D-酪甲酯鹽酸鹽
蝙蝠蛾擬青霉 D-脯甲酯鹽酸鹽
平田頭菇6-2 D-半胱
釀酒酵母 L-賴L-谷鹽
蠟樣芽胞桿 L-精L-天冬鹽
植物乳桿 DL-谷水合物
可溶黃色鏈霉 DL-半胱鹽酸鹽無(wú)水物
恥垢分枝桿 L-天冬酰一水
耶爾森氏屬 O-乙酰-L-絲鹽酸鹽
地衣芽孢桿 馬尿酰-組氨酰-亮
香栓孔 芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-蘇
核桃黑盤孢 芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-酪