商品介紹:
Boc-D-FMK是可滲透細胞,不可逆的,泛半胱天冬酶抑制劑。抑制TNF-α誘導的細胞凋亡的IC50值為39μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:634911-80-1 純度:95.0% 分子量:263.26 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
焦曲霉磺酰脲類藥物受體1抗體Anti-PTPRF Antibody棘皮動物微管關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白2(EML2)
潘泰萊里亞島鹽單胞菌突觸泡蛋白2A抗體Anti-PTPRC Antibody(PB0115)激肽原1(KNG1)
膠孢突觸融合蛋白1抗體Anti-PXN Antibody激肽釋放原(PK)
寡養(yǎng)單胞菌磷化核突觸蛋白α抗體Anti-PYY Antibody激肽釋放結(jié)合蛋白(KAL)
其他質(zhì)粒磷化核突觸蛋白α抗體Anti-PYY Antibody激肽釋放9(KLK9)
橄欖產(chǎn)色鏈霉菌離子轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白SLC7A9抗體Anti-PYROXD1 Antibody激肽釋放8(KLK8)
蠟樣芽孢桿菌乙酰轉(zhuǎn)運蛋白1抗體Anti-PTTG1 Antibody激肽釋放7(KLK7)
梭狀芽孢桿菌滑膜肉瘤X斷點蛋白5抗體Anti-PVRL1/NECTIN1 Antibody激肽釋放6(KLK6)
釀酒酵母腫瘤/抗原11.3抗體Anti-RAB10 Antibody激肽釋放5(KLK5)
茶樹菇外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白1抗體Anti-RAB11A Antibody激肽釋放4(KLK4)
青春雙歧桿菌唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集11抗體Anti-RAB11B Antibody激肽釋放3(KLK3)
布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗抗原Sema6A抗體Anti-RAB13 Antibody激肽釋放2(KLK2)
香菇S100A9抗體Anti-RAB14 Antibody激肽釋放15(KLK15)
哈茨木霉單羧轉(zhuǎn)運蛋4抗體Anti-RAB18 Antibody激肽釋放14(KLK14)
假單胞菌*神經(jīng)降壓受體3抗體(糖蛋白95)Anti-RAB27A Antibody激肽釋放13(KLK13)
黑曲霉轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體Anti-RAB27A Antibody激肽釋放12(KLK12)
蛋白激C結(jié)合蛋白NELL1抗體巨孢鏈霉菌小鼠子宮成纖維細胞提取物
蛋白激C結(jié)合蛋白NELL2抗體利迪鏈霉菌小鼠卵巢上皮細胞提取物
腦特異性跨膜蛋白抗體鏈霉菌小鼠子宮平滑肌細胞提取物
環(huán)一螺旋蛋白1抗體TG1 Strain小鼠子宮頸上皮細胞提取物
泛半胱天冬酶抑制劑(BOC-D-FMK)中慢生華癸根瘤 山姜
豬丹絲 19,20-(E)-瓦來薩明堿
球黑孢 葉下珠次
馬戍鏈霉 美迪紫檀
酵母屬 橙皮7-O-葡萄糖苷
鏈霉 異它喬糖甙
紫芝 木蘭脂
紫堇達明堿
Pseudofusicoccum stromaticum 升麻酮 3-O-alpha-L-拉伯糖苷
平菇 澤渥萜
弗雷德里克斯堡假單胞 白花前胡丁,(+)-川白芷內(nèi)酯
栗疫 19-表阿馬堿
草木樨中華根瘤 異阿魏酸
化妝品 金黃色葡萄球(陰性) 鐮葉芹二
泛生漆斑 (+)-白花前胡甲