以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Tofogliflozin(CSG-452)是SGLT2高效選擇性抑制劑,對(duì)人源、大鼠和小鼠SGLT2的Ki值分別為2.9、14.9和6.4nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1201913-82-7 別名:CSG-452 hydrate 純度:98.11% 分子式:C??H??O? 分子量:404.45 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
球孢白僵菌葡萄糖-6磷脫氫抗體Human TPRKB ELISA Kit大鼠蛋白(nephrin)免疫試劑盒
金針菇F5眼發(fā)育相關(guān)基因蛋白ODAG抗體Human TOR1AIP2(Torsin-1A-interacting protein 2) ELISA Kit大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)免疫試劑盒
鼠李糖乳桿菌特異性囊腫病液體蛋白15Human TRA2A ELISA Kit大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)免疫試劑盒
膠囊青霉特異性囊腫病液體蛋白15Human TPRX1 ELISA Kit大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)的酪激1型受體(NTRK1)免疫試劑盒
深紅酵母生長(zhǎng)激釋放因子受體抗體Human TPX2 ELISA Kit大鼠神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS/NOS1)免疫試劑盒
灰色鏈球菌G蛋白偶聯(lián)受體115抗體Human TRAM2 ELISA Kit大鼠神經(jīng)特異性烯化(NSE)免疫試劑盒
澳大利亞平臍蠕孢G蛋白偶聯(lián)受體10抗體Human TR2IT1 ELISA Kit大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)免疫試劑盒
釀酒酵母β-葡萄糖腦苷脂抗體Human TRAF1 ELISA Kit大鼠神經(jīng)肽W(NP-W)免疫試劑盒
栗褐芽孢桿菌半乳糖凝集相關(guān)蛋白A抗體Human TRA2B(Transformer-2 Protein Homolog Beta) ELISA Kit大鼠神經(jīng)肽Nesfatin-1 免疫試劑盒
白吉利絲孢酵母半乳糖凝集12抗體Human TRADD ELISA Kit大鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)免疫試劑盒
黃桿菌γ基丁運(yùn)載蛋白3抗體Human TRAF3 ELISA Kit大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體(TNFR superfamily,member 16)(NGFR)免疫試劑盒
釀酒酵母GTPIMAP家族成員1抗體Human TRAF3IP1 ELISA Kit大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體(proNGF)免疫試劑盒
塔里木類(lèi)芽孢桿菌GTPIMAP家族成員2抗體Human TPPP2 ELISA Kit大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)免疫試劑盒
紅色紅曲菌GTPIMAP家族成員3抗體Human Torsin A ELISA Kit大鼠神經(jīng)顆粒(NG/NRGN)免疫試劑盒
紅緣擬層孔菌GTPIMAP家族成員4抗體Human GDF10(Bone morphogenetic protein 3B) ELISA Kit大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒
明亮發(fā)光桿菌*GTPIMAP家族成員5抗體Human TOX2(TOX high mobility group box family member 2) ELISA Kit大鼠神經(jīng)降壓(NTS)免疫試劑盒
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:AR,6-10目或2-3mm連翹酯苷A
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:AR,8-16目或1-2mm桑根D
紅球菌Rhodococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:SPα-香附
SGLT2抑制劑(Tofogliflozin hydrate)蒼耳子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): dCDP, 2'-Deoxycytidine-5'-Diphosphate,3sodium saltFAM36A蛋白抗體包裝10MG
蒼術(shù)(茅蒼術(shù))(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): DMPFAM50A蛋白抗體包裝100g
蒼術(shù)苷A英文名稱(chēng): Dodecyl gallateFAM134C蛋白抗體包裝25g
蒼術(shù)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): dUMP, 2'-Deoxyuridine-5'-monophosphate, disodium salt凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體包裝5g
藏菖蒲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Indoxyl-Glucoside乙型肝炎病X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體包裝25g
藏紅花英文名稱(chēng): Lanthanum(III) oxide卵泡抑相關(guān)蛋白5抗體包裝5g
藏木香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Magnesium chloride, hexahydrate叉頭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C2抗體包裝100g
草果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Manganese (II) acetate, tetrahydrateFbx15蛋白抗體包裝25g
草烏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Neuraminidase from Clostridium perfringensFRMD2蛋白抗體包裝5g
草玉梅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Nickel (II) acetate, tetrahydrateFAM98B蛋白抗體包裝100ml
草質(zhì)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Nile redFAM50C蛋白抗體包裝25ml
草質(zhì)苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): N-PhenylureaFAM91A1蛋白抗體包裝1g
側(cè)柏葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Okadaic acid, free acidFRMD1蛋白抗體包裝5g
梣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Okadaic acid, sodium salt髓鞘缺陷相關(guān)蛋白抗體包裝25MG
茶黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Potassium carbonate, hydrate叉頭蛋白B1+B2抗體包裝1g