以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Amprolium鹽酸鹽是用于家禽的一種抗球蟲藥,是一種類硫胺素,通過抑制硫胺素吸收和碳水化合物合成而抑制球蟲的硫胺轉(zhuǎn)運(yùn)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):137-88-2 分子量:315.24 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
奈帕芬英文名稱: Osteostatin (human)原鈣粘附蛋白α2抗體包裝1g
萘普生英文名稱: Osteostatin (1-5) amide(human, bovine, dog, horse,mouse, rabbit, rat)配對(duì)盒同源基因4抗體包裝5g
萘普生鈉英文名稱: Osteostatin amide (human)白蛋白3抗體包裝1ml
尼卡巴英文名稱: p60 v-src (137-157)PRELP蛋白抗體包裝1g
尼美舒利英文名稱: p60c-src Substrate ILys(Biotin)原鈣粘附蛋白10抗體包裝5g
帕米磷二鈉英文名稱: PACAP-27 (human, mouse,ovine, porcine, rat)原鈣粘附蛋白β1抗體包裝10g
帕米膦英文名稱: PACAP-27 (6-27) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)原鈣粘附蛋白β10抗體包裝1g
帕潘立英文名稱: PACAP-38 (16-38) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)原鈣粘附蛋白β6抗體包裝100g
泮托拉唑鈉1.5合物英文名稱: PACAP-Related Peptide (1-29)(rat)原鈣粘附蛋白β14抗體包裝500g
泮托拉唑鈉一物英文名稱: Pancreatic Polypeptide,human鈣粘蛋白LKC抗體包裝5mg
替佐米中間體I英文名稱: Pancreatic Polypeptide, ratPLEKHA7蛋白抗體包裝5g
匹多莫德英文名稱: Parathyroid Hormone (1-38),human鈣粘蛋白21抗體包裝100g
匹卡米英文名稱: Pentagastrin鈣粘蛋白β12抗體包裝10g
匹可硫鈉;匹克硫鈉英文名稱: Peptide YY, Human磷化磷脂酰肌激調(diào)節(jié)亞單位gamma抗體包裝25g
撲熱息痛/對(duì)乙?;佑⑽拿Q: Peptide YY (canine, mouse,porcine, rat)狀旁腺激相關(guān)蛋白抗體包裝25mg
黑木耳Auricularia│auricula 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品核因子κB抑制物激α試劑盒澳茄新堿;Solasurine
地中海馬特爾氏菌Martelella│mediterranea 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR核因子κB試劑盒7-基-4-基;7-aMino
毛莖點(diǎn)霉Chaetophoma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.8%內(nèi)酯含量,BR核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 ELISA Kit9-基喜樹堿;9-Aminocampt
硫胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑(Amprolium hydrochloride)轉(zhuǎn)錄因子ETV7抗體阿里紅(標(biāo)準(zhǔn)品) Lanthanum (III) chloride, hexahydrate
ELAVL1抗體阿魏(標(biāo)準(zhǔn)品) Molybdic oxide
胚胎干相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抗體阿魏(標(biāo)準(zhǔn)品) Papain 2x crystallized from papaya Latex
表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體抗體阿魏乙酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Sodium benzenesulfonate
紅膜蛋白條帶EPB41L5抗體矮地茶(標(biāo)準(zhǔn)品) Superoxide dismutase from Bovine Erythrocytes(SOD)
早期發(fā)育調(diào)控蛋白1抗體艾黃;六棱菊亭(標(biāo)準(zhǔn)品) Triacontanol
轉(zhuǎn)錄因子ETV6抗體艾葉(標(biāo)準(zhǔn)品) 4-Hydroxybenzaldehyde
跨膜通道蛋白8抗體安格洛苷 C(標(biāo)準(zhǔn)品) Albumin, from bovine pH 7.0 Low endotoxin
尤文氏肉瘤相關(guān)EWS蛋白抗體安石榴甙(標(biāo)準(zhǔn)品) Clostripain