以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Dapagliflozin是一種SGLT2的抑制劑,為治療2型糖尿病的藥物。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):461432-26-8 別名:BMS-512148 純度:99.89% 分子量:408.87 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
北成對(duì)桿菌轉(zhuǎn)錄因子ETV7抗體Human FGGY (FGGY carbohydrate kinase domain-containing protein) ELISA KIT犬基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)免疫試劑盒
小立碗蘚類芽孢桿菌ELAVL1抗體Human FBLL1 (rRNA/tRNA 2′-O-methyltransferase fibrillarin-like protein 1) ELISA KIT犬基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌胚胎干相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human FIZ1 (Flt3-interacting zinc finger protein 1) ELISA KIT犬肌激同工MB(CK-MB)免疫試劑盒
間座殼表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體抗體Human FAP (Prolyl endopeptidase FAP) ELISA KIT犬肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒
墨西哥劍菌紅膜蛋白條帶EPB41L5抗體Human FLYWCH2 (FLYWCH family member 2) ELISA KIT犬肌酐(Cr)免疫試劑盒
禾粘座孢霉(或禾漆斑菌)早期發(fā)育調(diào)控蛋白1抗體Human FLYWCH1 (FLYWCH-type zinc finger-containing protein 1) ELISA KIT犬黃體生成(LH)免疫試劑盒
絨囊耙齒菌轉(zhuǎn)錄因子ETV6抗體Human MCP/CD46(Membrane Cofactor Protein) ELISA Kit犬環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒
膠凍樣芽胞桿菌跨膜通道蛋白8抗體Human PSEN2(Presenilin-2) ELISA Kit犬環(huán)磷鳥(niǎo)苷(cGMP)免疫試劑盒
雜色曲霉尤文氏肉瘤相關(guān)EWS蛋白抗體Human FKRP (Fukutin-related protein) ELISA KIT犬環(huán)加氧2(COX-2)免疫試劑盒
桔橙小單孢菌核外切1抗體Human FUS(RNA-binding protein FUS) ELISA Kit犬紅生成(EPO)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌多發(fā)性肌炎/硬皮病自身抗原2抗體Human FUNDC1 (FUN14 domain-containing protein 1) ELISA KIT犬胱天蛋白12(Casp-12)免疫試劑盒
棕黑腐質(zhì)霉核糖體RNA合成蛋白40抗體Human FNBP1L (Formin-binding protein 1-like) ELISA KIT犬骨形成蛋白-1(BMP-1)免疫試劑盒
墳?zāi)构?jié)桿菌核糖體RNA合成蛋白42抗體Human FNBP4 (Formin-binding protein 4) ELISA KIT犬骨橋(OPN)免疫試劑盒
雞白痢沙門氏菌多發(fā)性外生骨疣樣蛋白3抗體Human FGF22 (Fibroblast growth factor 22) ELISA KIT犬骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒
布雷鏈格孢轉(zhuǎn)錄因子EYA1抗體Human FHOD1 (FH1/FH2 domain-containing protein 1) ELISA KIT犬骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒
pBIFC-VC155磷化埃茲蛋白抗體Human FYB (FYN-binding protein) ELISA KIT犬骨成型蛋白7(BMP7)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品L-羥脯
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品L-精
刺盤孢屬Colletotrichum│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7%(GC加蘭他敏
SGLT2抑制劑(Dapagliflozin)硫肼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vindesine sulfate磷化分裂周期蛋白25抗體包裝25g
硫卷曲霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zalcitabine,DDC磷化分裂周期蛋白25抗體包裝5g
硫卡那霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trans-Zeatin Riboside 半胱蛋白8抗體包裝25g
硫鏈霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zileuton半胱蛋白蛋白9-p10抗體包裝250g
硫奈替米星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ZileutonC型凝集結(jié)構(gòu)域家族5成員A抗體包裝50g
硫羥喹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Enoxacin周期依賴激1抗體包裝1g
硫氫吡格雷 II型(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ofloxacin衰老抑制基因抗體包裝5g
硫慶大霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ofloxacin環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體包裝25g
硫沙丁(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Abacavir酪蛋白激1γ1抗體包裝5g
硫雙肼屈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Abacavir21號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框88抗體包裝1mg
硫特布他林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nicotinamide21號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體包裝1g
硫頭孢匹羅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nicotinamide周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體包裝5g
硫妥布霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cyproterone acetate周期依賴性激9抗體包裝1g
硫西梭米星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cyproterone acetate分裂周期蛋白6抗體包裝5g
硫腺嘌呤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Megestrol base周期調(diào)控因子34包裝1g